你好，我想请问有关PET28a(+)载体使用的一些问题？请大家赐教，谢谢啦：）我要表达的序列是一段部分序列,没有起始密码子,那在设计引物时在5'端用加起始密码子ATG,我看了PET28a(+)载体使用说明上说以"a"为结尾命名的载体的起始密码子用GGA,我现在不知道该用哪个了?还有就是PET28a(+)载体做原核表达时的能承载的最好表达量大约是多少?

你的序列如果可以使用NdeI酶切位点，那么可以直接利用NdeI （CATATG）酶切位点中的ATG,你序列中有无起始密码子都无所谓的。表达量我用pET28a 做过的最高的是每升发酵液（摇瓶）可以达到总蛋白达到0.8g，目的蛋白0.7g，上述情况是没有优化表达条件的情况下。