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[原核表达] 求助：实验中发现一个奇怪的问题


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1# 大 中 小 发表于 08-4-11 17:06  只看该作者
武林三国

求助：实验中发现一个奇怪的问题

连接表达载体后转入大肠杆菌bl21，然后抽提质粒，单酶切与预期符合，目的基因加PET22b共8000bp，但是用双酶切不正确，表现为：用我的上下游引物酶切位点切的结果和单酶切一样，只有一条8000的带，而另外选择两个酶切位点切出来又是正确的。真是奇怪哈
更奇怪的是，实验室另外一个同学和我做的结果一摸一样。
有人说是自己设计的酶切位点坏了，但是没理由两个人都坏啊！
大家帮忙分析下！

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点击打开/关闭shenhongjie详细信息
2# 大 中 小 发表于 08-4-11 20:17  只看该作者

bl21可能吧你上下游引物序列修饰了

bl21可能吧你上下游引物序列修饰了

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3# 大 中 小 发表于 08-4-14 20:05  只看该作者
武林三国
能说得详细点吗？

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4# 大 中 小 发表于 08-4-16 16:26  只看该作者
是不是第二个酶有问题！？

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5# 大 中 小 发表于 08-5-20 15:47  只看该作者
武林三国
你连接入载体的时候，是不是有一个酶切位点用同尾酶粘性末端连接的？连接之后，两个酶切位点都消失了。

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