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[原核表达]
求助:选择什么样的表达载体
polly110
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发表于 08-4-11 09:36
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求助:选择什么样的表达载体
我的实验目的是:红色荧光蛋白在双歧杆菌中的表达,这可行么?表达载体千千万~~~我该选择哪种?
请大家帮帮忙!谢谢!
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cricketbaby
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发表于 08-4-11 11:29
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我做EGFP,选用的是PET-32a,表达很好,不知道是否适合你,还有你的RFP 可以容易被观察到吗?因为我的EGFP在菌里面表达很高,但在藻里表达太低。很郁闷的
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polly110
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发表于 08-4-11 11:54
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谢谢!我用RFP也是一个尝试,也不知结果会如何
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shuanhu2007
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发表于 08-4-11 17:10
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我做GFP,在乳酸菌中表达,你的应该也可以,我们用的是自己构建的载体!
再有,希望你用一种穿梭表达载体,要启动子强的,比如带T7启动子载体,这样,你可以在前期构建完成之后转化大肠杆菌,因为有荧光,所以效果一目了然!然后提质粒再转双歧杆菌,这样比较好转化,成功率高,要不然直接拿连接产物转双歧杆菌(电转)会比较困难。这可是得到实践验证的:)你也可以把pIRES2-EGFP中EGFP切掉,换成你的红色荧光蛋白基因。可能会有意想不到的效果。一人之见,仅供参考。
这条路不光通向成功!
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polly110
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发表于 08-4-11 20:07
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非常感谢你的建议!犹如茫茫海洋上看到闪亮的灯塔,谢谢!
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