各位论坛高人:
       我以前是做蛋白那块的,这学期导师又安排了新任务,让我克隆出一个基因,然后表达了,才可以毕业,我第一次接触分子方面的实验,请教高人给我指点一下,究竟从哪里开始入手?这个问题,我这两天一想起来就郁闷呢,谢谢了

[ 本帖最后由 Jack 于 08-3-2 10:02 编辑 ]

1, 搜索该基因序列，以及该基因可读框等信息，搜索相关文献看有无该基因的表达的报道，可作参考。

2，根据可读框，设计引物。设计时需要注意一切特殊的序列，例如引导肽序列，跨膜序列等。如果需要，也许考虑在内。引物设计需要加入表达载体克隆所需要的限制性内切酶位点。

3，PCR扩增，将产物克隆至T载体，挑阳性克隆测序，选择序列正确的克隆至表达载体。

4，将表达载体转至适当宿主菌或者细胞，进行表达。

5，如果目的基因未知，这个就比较复杂了，可参考论坛相关帖子。

首先非常感谢您的帮助，不过我要做的目的基因确实是未知的 ，唉····那该怎么办呢

麻烦你们了，各位高手们,请帮帮我吧!!!

:'( :'( :'(

未知基因，是否在相近物种有报道？

比较常用的方法：

1、NCBI，或EXPASY,搜索相近物种该基因的蛋白质序列
2、序列比对，找出保守区，设计间并引物。
3、得到片段，RACE得全长
4、酶切入表达载体

你的基因具体是什么？说说看呢。

如何研究一个新的ORF？
http://www.genecool.com/bbs/thread-9216-1-1.html

看看这个.

呵呵论坛去年有不少东西楼主可以参考一下，比如纤夫兄所给链接。新基因主要还是看你所做的物种以及相关物种的一些资料的收集，如果是你做的物种中该基因为新基因而其他物种已经有该基因的报道，那么你的试验应该不算太复杂。只要根据NCBI上的序列进行搜索即可，然后BLAST出保守区域，设计相应引物。或者进入意大利的tigar网站，该网站有很全的各种物种的EST序列分析，应该也有一定用处 ！

引用:

原帖由 水榭听香 于 08-2-22 18:02 发表
未知基因，是否在相近物种有报道？

比较常用的方法：

1、NCBI，或EXPASY,搜索相近物种该基因的蛋白质序列
2、序列比对，找出保守区，设计间并引物。
3、得到片段，RACE得全长
4、酶切入表达载体

你的基因具体是什么？说说看呢。 ...

首先非常之感谢啊,我就是第一次做,所以,你说的那些软件我都还不太懂,还不是很熟练,如果有人可以帮我做一对引物出来,就是示范给我看一次,就好了,我有的只是大概印象,一点具体的概念都没有,怎么班啊?

现在由于实验需要，必须克隆得到Candida shehatae（CICC1766）木糖醇脱氢酶（xylitol dehydrogenase， XDH）的基因，但是该基因序列是未知的，我以前只做过已经序列的的基因克隆，所以现在很犯愁，不知怎么做，哪位高人能告诉我一下大概的流程。尤其是序列比对，找出保守区，设计间并引物；得到片段，RACE得全长这两步，不知怎么操作，望各位高人不吝赐教，不胜感激！