毕赤酵母表达系统的优越性
毕赤酵母表达系统的优越性
作为真核表达系统,毕赤酵母表达外源基因具有许多其它蛋白表达系统所不具备的优点。概括如下:
(1)酵母是真核生物,毒性比细菌小。
(2)酵母繁殖速度快,营养要求低,培养基廉价,便于工业化生产。
(3)具有强有力的乙醇氧化酶基因(AOX1)或磷酸甘油酸脱氢酶(GAP)基因启动子作为外源基因启动子,可严格调控外源蛋白的表达,我们利用GAP基因启动子成功的调控了HPV16一E6的分泌表达。
(4)高稳定性。该系统的载体能和核基因组进行整合,所以构建的菌株稳定,一般不会出现外源基因随生长繁殖而丢失现象。
(5)作为真核表达系统,可对表达的蛋白进行翻译后的加工和修饰,使表达的蛋白质获得正确的折叠和N一末端加工,从而使表达出的蛋白具有生物活性,我们利用毕赤酵母表达系统表达了的新疆家蚕抗菌肽,其表达产物具有明显的抑菌活性。
(6)可高密度发酵培养,并且能够耐受较高的流体净压,在发酵罐中细胞干重甚至可达120g/L以上。
(7)表达量高。如在毕赤酵母中表达了牛胰蛋白酶原,通过在六个位点,分别用一个天冬氨酸替换赖氨酸,改变了胰蛋白酶原天然前导肽序列。这种突变后,瓶摇表达产物胰蛋白酶原量为10mg/L,用6L发酵可达到40mg/L。许多蛋白可达到每升克级以上水平,如破伤风毒索c片段表达量高达12g/L。
(8)在毕赤酵母中表达的蛋白既可存在于胞内,又可分泌至胞外。毕赤酵母自身分泌的蛋白(背景蛋白)非常少,十分有利于纯化,如毕赤酵母表达人白细胞介素l1时,经过离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤等纯化,产品纯度大于97%。
(9)糖基化程度低。和酿酒酵母相比,毕赤酵母中加到翻译蛋白上的糖链长度平均每条侧链为8~14个甘露糖残基,比酿酒酵母每条侧链平均50~150甘露糖残基短得多。
搜索更多相关主题的帖子:
毕赤 优越性 酵母 系统 表达