鼠IgG定量ELISA实验参比品的制备及其应用
黄永国 张春燕 龚劲松 陈 妍 张 波 李方和
目的：制备一组用于小鼠IgG定量 ELISA检测的实验参比品。
方法：将三株杂交瘤细胞制备的小鼠腹水等体积混合，以葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析纯化IgG，凯氏定氮法测定IgG含量，SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳作纯度鉴定并据此校正其 IgG浓度，以特定保存液将其稀释成既定浓度系列 ，根据其在 ELISA中的反应特征 ，制备浓度(自然对数)一A 值标准曲线 ，并将其用于对一组杂交瘤细胞培养上清中鼠单克隆抗体的IgG定量测定。
结果：提纯的鼠IgG经鉴定纯度达97．1％，且反应特性良好 ，其IgG含量与 ELISA检测信号间有高度的相关性(r=0．990)。不同浓度的稀释系列经8次反复冻融，检测信号无显著变化 ，变异系数(c 为1．87％～6．47％。将标准曲线计算所得浓度对设定浓度做回收实验分析回收率89．1 ～108．3 。并用其测得一组杂交瘤细胞培养上清的鼠 IgG含量为8．0～51．5 mg／L。
结论：鉴定结果显示制备物定量准确，浓度范围适中，稳定性好，对于早期杂交瘤细胞分泌能力以及抗体稳定性的评价 、单抗制剂的鉴定具有一定的应用价值。
