戊型肝炎病毒结构区ORF2蛋白在巴氏毕赤酵母中的胞内表达与纯化的初步研究
摘要：为寻求新型表达系统来研制戊型肝炎基因工程疫苗，利用甲醇营养型酵母肼却啪表达系统表达戊型肝炎病毒(HEV)结构区ORF2蛋白。采用PCR方法从HEVcDNA中扩增得到的ORF2基因克隆到酵母表达载体pPIC35K上，构建成重组质粒pPIC3．5KORF2。该质粒转化酵母菌GSI15，经G418筛选得到高拷贝转化子。转化菌株经Mut表型鉴定后，用含甲醇的培养基诱导表达，SDS-PAGE及ElISA筛选高表达活性菌株，放大培养后进行亲合层折纯化。在该系统中成功地表达了高生物活性的HEVORF2蛋白．经亲和层析纯化后扫描分析重组蛋白分子量约为59kD，纯度可达96％。Westernblotting证实，它与HEVORF2单克隆抗体有特异性反应。HEV结构区ORF2蛋白在甲醇营养型酵母中的成功表达，以及初步纯化得到的具有强免疫学活性的重组蛋白，为研制新型戊型肝炎基因工程疫苗奠定了基础。
关键词：戊型肝炎病毒；开放读码框架；异源基因表达；蛋白纯化；巴氏毕赤酵母
