用的是12孔板， 转染前十个小时，将有血清无抗生素的DMEM培养基换成了无血清无双抗的1ml/孔培养基，换液前用PBS漂洗一次。此时细胞的密度不太高大概70%左右，次日早上做转染，用的是lipo 2000  invitrogen的，每孔4微升的脂质体 用100微升培养基稀释，步骤都按照说明书。其中一孔细胞未加任何试剂（正常细胞），一孔只加稀释4微升的脂质体不加DNA，其他各孔分别加了不同比例的脂质体和质粒DNA（PEGFP-N1以及联入目的片段的PEGFP-N1）。20多小时后电镜下观察，未加任何试剂和只加脂质体的细胞生长基本正常，而转染了质粒的细胞很多死亡。是因为自己小提的质粒不纯吗，测od都在1.75左右，还有其他原因吗？
    第一次做，请各位高手，有经验的战友帮帮忙，Many thanks！

1，建议你的质粒用过树脂柱的方法纯化，例如QIAgen的树脂柱型的质粒小提试剂盒。或者采用去内毒素的质粒kit，有国产的。这样转染效率高，毒性小。

2，只加脂质体的细胞没有死亡，说明不是脂质体的毒性。质粒可能有2方面的原因，一个是如你所说，质粒不纯，可能对细胞生长有毒性。二来是表达产物有毒性，这个一般较难遇到，不知道其他酷友是否遇到过？

非常感谢版主提供的建议，我打算用QIAGEN的试剂盒提一下质粒。
  因为我的连入片段是含有终止密码子的，我实验的主要的目的是看该终止密码子是否被通读 目的片段长1.2K，连在PEGFP-N1上，若通读则有EGFP表达，可转染后36个小时观察，所有转插入片段的载体都没有绿色荧光（所有转质粒细胞都有部分死亡,可转染空载的细胞有绿色荧光），不知道是否能说明没有通读？
  不知有人做过类似的实验吗？希望大家给与建议，谢谢啦~~~

结果如何了   是不是质粒纯度的问题？

这个问题如jack兄所说，内毒素有一定的影响。我之前做转染倒是遇到过，用invitrogen公司以及QIAGEN公司公司除内毒素质粒抽提试剂盒可以得到较纯而内毒素较少的质粒。但是这两个试剂盒很贵。你可以用你的质粒做一个内毒素检测，一般来说这个影响不算太大，还不至于像你所说的没有表达那么严重。至少有一部分是能够进入细胞的阿。除此之外，该质粒本身对细胞是否有影响或者表达蛋白是否有影响，这个个人认为还是可以考虑的。我现在所接收的这个项目中有一个实验就是表达蛋白对宿主细胞的毒性实验，目前还在安排人做，有结果了，我会把实验数据拿上来大家共享一下。

请问楼主你的这个问题解决了吗?我遇到的是一样的,但是我转染的质粒是用PROMEGA 的中提抽提的，纯度为1.9，但无论空质粒还是重组质粒都一样在转染后出现大量死亡，即使在转染6H后换液，情况也是一样的，请高手指点啊，焦虑中～～～～