木瓜凝乳蛋白酶的单甲氧基聚乙二醇化学修饰及其对酶活力和抗原性的影响
舒薇 房师松, 崔堂兵, 郭勇
目的 研究木瓜凝乳蛋白酶(Cp)的单甲氧基聚乙二醉(mPEG)化学修饰时酶活力和杭原性的影响,为该酶的修饰改性提供实验依据。
方法:在底物保护和无底物保护下,分别以单甲氧基聚乙二醉的两种活化产物mPEG,和mPEq对木瓜凝乳蛋白酶进行共价修饰,以三峭基苯磺酸法测定各修饰酶的平均孰基修饰度;以大分子酪蛋白和小分子 BAEE为底物分别测定各修饰酶的酶活性;以ELISA法检测各修饰酶的抗原性。
结果:①mPEG,和mPEq修饰均能降低及消除酵的抗原性,其中mPEq的效果更为明显。②二者的化学修饰均使酶活力有所下降,其中mPEG,修饰酶的酶活力(分别以酪蛋白和BAEE为作用底物,下同)均高于mPEq修饰酶的酶活力(尤其是当底物为大分子蛋白质时)。③底物保护下的修饰酶酶活力均显著高于无底物保护的酶活力。
结论:以mPEG,为修饰剂,在底物保护下的CP修饰能在消除抗原性的同时,获得仍具较高酶活力的修饰酶。