应用AdEasy腺病毒载体系统构建人骨形成蛋白2基因重组腺病毒
【摘要】目的 利用 AdEasy腺病毒载体系统构建人骨形成蛋白2(BMP2)基因重组腺病毒并在293E细胞中扩增制备重组病毒。
方法 自人骨形成蛋白 2 真核表达载体pcDNA3-hBMP2中酶切出hBMP2 基因，插入pAdtrackCMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAdt rackCMV-hBMP2，经酶切线性化后，采用电穿孔转化到事先电转化腺病毒骨架质粒pAdEasy的BJ5183大肠杆菌电感受态细菌中，挑选同源重组质粒，酶切线性化重组质粒并转染 293E细胞包装成重组病毒颗粒，荧光显微镜观察绿色荧光表达。重组病毒上清感染293细胞，荧光显微镜观察绿色荧光表达。
结果 经限制性内切酶检测和 GFP表达证实成功地构建了携带 hBMP2基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒。
结论 成功地构建了携带 hBMP2基因的重组腺病毒载体，为进一步研究rBMP2 基因治疗奠定了基础。
【关键词】 腺病毒; 骨形态发生蛋白; 基因工程
