抗热休克蛋白 72多克隆抗体血清的制备和检测
黄帆 徐康 吴兴刚 马中富 林正
目的：探讨在大肠杆菌中表达人热休克蛋白72(hHsP72)与组氨酸 (His)的融合蛋白并制备其抗体血清的方法 。
方法：将hHSP72片断插人His融合表达载体 pPROEX一1，重组载体酶切鉴定后 ，在大肠杆菌中经异丙基一p—D一硫代半乳糖 苷(IPTG)诱导表达获得His—hHSP72融合蛋白。采用纯化后的HSP72免疫新西兰白兔 ，制备抗血清；蛋白质免疫印迹法 (Western blot)检测 重组 抗原的免疫活性 。
结果：重组质粒酶切鉴定结果表明，hHSP72基因已正确插人到 pPROEX一1 中，经IPTG诱导后，表达出分子质量约为73 ku的蛋白，获得了效价为 1：100 000的多克隆抗体。Western blot检测证明 ，所制备的多克隆抗体可以与 hHsP72特异性结合 ，其效价高于市售的单克隆抗体 。
结论：用 hHsP72片断在大肠杆菌中能成功表达 ，并能制备得到多克隆抗体 ；这种多克隆抗体是一种新的高特异性和高灵敏度的试剂 。
【关 键词】 热休克蛋白72； 载体构建 ； 多克隆抗体
