表达丙型肝炎病毒NS3抗原的重组腺病毒构建及体外表达

    摘要:为探索研制丙型肝炎疫苗的新途径，以期获得防治丙型肝炎的重组腺病毒减毒活疫苗，我们构建了表达丙型肝炎病毒(Hepatitis Cvi rus，HCV)非结构蛋白3(non2st ructural protein 3，NS3)抗原的重组腺病毒 RAd2NS3 ,并检测其在体外表达。应用 PCR从真核表达质粒 pRC/NS3中扩增编码HCVNS3蛋白(329-935aa)的基因片段，定向克隆到重组腺病毒AdEasy-1系统的穿梭质粒pAdTrack2CMV上，采用细菌内同源重组"两步转化法"构建携带HCV NS3基因的重组腺病毒基因组质粒pAd2HCVNS3，转染293细胞，成功包装出重组腺病毒 RAd2 NS3，利用它有效地感染人肝癌细胞株HepG2，经RT2PCR及免疫印迹等不同方法检测表明，被感染细胞能表达HCVNS3蛋白，为后续进行重组腺病毒在动物体内诱导抗HCV免疫应答能力的研究奠定了基础。

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大肠杆菌表达NS3不行吗，我们用它做诊断试剂，效果很好啊。