各位前辈：
       你们好！我刚刚接触分子生物学这一块，以前我是做生化的。现在我想克隆一个已知全长为1826的基因序列，其序列以登陆基因库，且编码区大约为1760左右。根据全长序列，我在编码区附近设计了特异性引物，两个引物的GC含量为43.3和31.3，TM值为52.2和52.6。
       为了寻找优化条件，我对Mg离子做了1.0，1.2，1.5，2.0，2.5，3.0的梯度；也对退火温度做了递减PCR，即前十个循环从57度到48度递减1度，然后再以48度做20个循环。但最后结果还是不够理想，基本没有明确的条带，大部分都是弥散状态。对此我很苦恼，希望你们能多多指教！谢谢！
      （另附两张电泳图）

我觉得没有必要对mg2+设梯度，直接按pcr说明书用量就行，没问题。
从你的胶片，可以看出主要是引物二聚体，建议换个区域设计引物，
引物设计请参考
帖子
http://bbs.genecool.com/thread-2190-1-1.html
引物设计
http://bbs.genecool.com/thread-8149-1-1.html

建议先优化退火温度，分别以50～57度等8个退火温度做PCR。

如果有特异条带，可适当优化Mg离子浓度以提高扩增效率。也可不做。

如果仍然没有扩增，可能引物并不合适，建议更换引物。

条带弥散的很厉害，说明引物的专一度不够呀！
建议换一对退火温度高的引物，优化退火温度。
做前先检查一下模板质量，定好合理的加样量再做！

我个人认为主要是模板的问题，介意换个别人能做出来的模板试试，来核查一下自己的模板是否有问题。

首先看你的模版是不是好不好，认为最主要原因是引物的设计。你查查看，先别忙模条件，设计不好，后面就白费

这个图真的好多问题啊,
特别是模板、胶都可能有问题啊。
你可以再试一下，换种酶P一下，其实离子浓度的差异不值得研究
同时，你的PCR温度可上调一下，大概两度吧，
若还有问题，你就要换引物了，