信号肽序列对毕赤酵母表达外源蛋白质的影响
信号肽序列对毕赤酵母表达外源蛋白质的影响
摘要 乙醇氧化酶启动子被分离、克隆，并建立了转化方法后，毕赤酵母已被发展成为一种高效的外源蛋白表达宿主。为了进一步提高外源蛋白质的分泌表达，对信号肽序列进行了研究。首先按毕赤酵母的偏爱密码合成了酿酒酵母的α因子信号肽序列 MF4I，随后在MF4I信号肽序列的N端分别引入1～10个毕赤酵母Aox1蛋白质的N端氨基酸，构成10种不同的分泌信号肽序列，10种不同的分泌信号肽序列被用于植酸酶基因的毕赤酵母分泌表达。以上新的信号肽序列都可使植酸酶的分泌表达量增加，而以N端增加A、I、P三个氨基酸的信号肽序列引起的提高最大；和野生型的酿酒酵母α因子信号肽序列相比，使植酸酶分泌表达量增加5倍，摇瓶中植酸酶的分泌表达量为90 mg/ L。此外在MF4I信号肽的引导序列和内切蛋白酶间增加了EEAEAEAEP和K共10个氨基酸，进一步提高信号肽的分泌效率，使表达又提高约35 %，使得摇瓶中酸性植酸酶的表达量达到120mg/L，是pPCI9K表达量的8倍。
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