我将目的片段与载体连接后，转入大肠杆菌DH5α中，转化成功，挑取阳性克隆，抽提质粒，然后用HindIII，BamHI双酶切，却怎么也得不到目的片段。我又用抽提的质粒做模板，做了一个pcr反应，电泳条带在100-200bp之间（目的DNA长度330bp左右）。求高手帮助.

楼主，你是怎么鉴定你转化成功了的？
长了菌并不表示一定都是阳性克隆，需要做一些鉴定工作，比如表达鉴定、PCR鉴定、酶切鉴定、测序鉴定等。
从你所说的来看，就是一个PCR鉴定不正确的克隆罢了。得从克隆上找原因吧。

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是蓝白板筛选吧,根据不同的颜色菌就可以确定其是否是阳性克隆,但是楼主出现的那种情况,可能是你克隆进去的目的片段就是非特意片段,酶切不出来,可能是酶失活,或者提的质粒不纯影响了酶切反应吧

同意楼上的说法

[quote user="冷酷到底"]楼主，你是怎么鉴定你转化成功了的？
长了菌并不表示一定都是阳性克隆，需要做一些鉴定工作，比如表达鉴定、PCR鉴定、酶切鉴定、测序鉴定等。
从你所说的来看，就是一个PCR鉴定不正确的克隆罢了。得从克隆上找原因吧。[/quote]

同意你的观点。

同上1！呵呵

可能是假阳性，要多读写文献