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我是新人，想请教大家一个入门问题，希望大家指点，谢谢


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1# 大 中 小 发表于 07-12-10 14:40  只看该作者

我是新人，想请教大家一个入门问题，希望大家指点，谢谢

我有6-7份HCV阳性血清，请问我该怎么用PCR的方法从这些血清中扩增出完整的HCVRNA序列的cDNA（PCR可以从RNA扩增RNA吗？）克隆及C区和NS3区的核酸序列，我需要把C区和NS3区的序列插入表达质粒载体里做原核表达，得到重组蛋白，作为体外诊断试剂的抗原用。请问大家我该怎么做呢？我对PCR及基因工程都不太懂,现在正在努力啃书,希望各位朋友不吝指教，真的非常感谢~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~

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2# 大 中 小 发表于 07-12-10 15:24  只看该作者
首先建议你看一下RTPCR相关基础知识，然后在论坛里看看引物设计方面的知识。去NCBI查你所需的基因序列，然后设计引物扩增，当然，扩增前要先从血液中提取总RNA。等RTPCR扩出CDNA后再考虑下一步吧，一步一步做。祝你好运。
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  • kaige88 威望 +1 精彩解答 07-12-12 21:56

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3# 大 中 小 发表于 07-12-10 20:18  只看该作者
非常感谢hyde朋友  你的建议我觉得很有价值,还好论坛里资源丰富,有关RTPCR的书我已经下下来了,我还有一个问题:我也不太会生物信息学..要怎么在NCBI的GENEBank里找到标记好ＲＮＡ序列各区域的信息呢？

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4# 大 中 小 发表于 07-12-10 20:44  只看该作者
我没有查过RNA序列，不过论坛里好像有NCBI的教程吧？或者上网去搜一下看看，应该很多的。逆转录方面应该有不少帖子，你可以在论坛内搜一下。我也没做过，祝你好运啊！

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5# 大 中 小 发表于 07-12-10 21:27  只看该作者
HCV的全基因组已知（这里忽略突变），NCBI的数据应该非常详细，其实最应该做的应该是多看文献，自然知道试验构思
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  • kaige88 威望 +1 精彩解答 07-12-12 21:57

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6# 大 中 小 发表于 07-12-10 22:39  只看该作者
武林三国
呵呵，谢谢hyde朋友nano斑竹的建议~~~我在论坛里搜一下先~~

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