毕赤酵母培养基配方及配制方法
毕赤酵母培养基
YPD 或YPED:Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)
配方:1% Yeast Extract ,2% Peptone ,2% Dextrose (glucose)
配制方法:
1 溶解10gYE, 20gPEP于900ml水中,如制平板加入20g琼脂粉
2 高压20min
3 加入100ml 10×D
YPD-遗传霉素平板
配方:1% 酵母浸出物, 2% 蛋白胨,2%葡萄糖 ,2% 不同量的遗传霉素
配制方法:
1 溶解2.5g酵母浸出物,5g 蛋白胨,5g琼脂粉于225ml 去离子水中
2 高压灭菌20min
3 加入25ml 10×D,混匀
4 待YPD 冷至55-60 度,加入合适量遗传霉素贮存液(100mg/ml遗传霉素),同时也制几个不含遗传霉素的YPD 平板
5 混匀,不要产生太多气泡
6 倾倒10cm彼得里培养皿,凝固后,倒置存于4 度,可放至少6 个月
MGY 及MGYH(minimal glycerol medium±histidine)1L
配方:1.34% YNB ,1% 甘油,4×10-5% 生物素, ±0.004% 组氨酸
配制方法:
1 在800ml水中加入100ml 10×YNB,,2ml 500×B,100ml 10×GY
2 培养his4 菌株,需加入组氨酸(称为MGYH),加入10ml 100×H 贮存液。
3 存于4 度,可放2个月
RD及RDH 液体培养基:regeneration dextrose medium±histidine 1L
配方:1M山梨醇 2%葡萄糖 1.34%YNB 4×10-5%生物素 0.005%氨基酸 ±0.004%组氨酸
配制方法:
1 溶解186g山梨醇于700ml水中
2 灭菌20min
3 放冷并置于45 度水浴
4 准备预温(45 度)的混合液
100ml 10×D
100ml 10×YNB
2ml 500×B
10ml 100×AA
88ml灭菌水
加至山梨醇溶液中
5 培养his4 菌株,需加入组氨酸,在4 中45 度预温混合液在加入10ml 100×H。4 度保存,可放几个月
RDB或RDHB琼脂平板:
配制方法:
1 溶解186g山梨醇于700ml水中,加入20g琼脂粉
2 灭菌20min
3 将溶液置于60 度水浴,以防止溶液变稠
4 准备RD 及RDH中用到的预热的(45 度)混合物,加至山梨醇/琼脂粉溶液中。如选择HIS+转化子,不要加组氨酸。
5 制备平板,放于4度,可放几个月。
RD及RDH 上层琼脂:
配置方法:
1 溶解186g山梨醇于700ml水中,加入10g琼脂或琼脂糖
2 灭菌20min
3 置于60 度水浴
4 准备RD 及RDH中用到的预热的(45 度)混合物,加至山梨醇/琼脂粉溶液中,如选择HIS+转化子,不要加组氨酸。
5 如立即作转化,将溶液置于45 度
6 存于4 度,可放几个月
MD,MDH (minimal dextrose medium±histidine) 1L
配方:1.34%
YNB, 4×10-5% 生物素, 2%葡萄糖
配制方法:
1 灭菌800ml 水
2 于60 度下加入100ml 10×YNB,2ml 500×B, 100ml 10×D
3 制MDH 时,加入10ml 100×H,混匀存于4 度
4 如制备平板,于第一步加入15g琼脂粉
5 倒置平板,4 度放置几个月
MM、MMH (minimal methanol ±histidine) 1L
配方:13.4%YNB 4×10-5%生物素 0.5%甲醇
配制方法:
1 灭菌800ml 水
2 于60 度 下加入100ml 10×YNB, 2ml 500×B, 100ml 10×M
3 制MMH时,加入10ml 100×H,混匀存于4 度
4 如制备平板,于第一步加入15g琼脂粉
5 倒置平板,4 度放置几个月
BMG、BMM (Buffered minimal glycerol (methanol) 1L
配方:100mM
磷酸钾 ,PH6.0
1.34% YNB, 4×10-5% 生物素, 1% 甘油或0.5%甲醇
配制方法:
1 灭菌700ml 水,
2 冷至室温,加入下列:100ml 1M磷酸钾缓冲液PH6.0, 100ml 10×YNB, 2ml 500×B, 100ml 10×GY
3 制BMM 时,加入100ml 10×M取代10×GY
4 放置于4 度,可放2 个月
BMGY Buffered Glycerol-complex Medium
BMMY Buffered Methanol-complex Medium 1L
配方:1% 酵母浸出物, 2% 蛋白胨, 100mM 磷酸钾, PH6.0
1.34% YNB, 4×10-5%生物素,1% 甘油或0.5% 甲醇
配制方法:
1 溶解10g酵母浸出物,20g蛋白胨于700ml水中
2 灭菌20min
3 冷至室温,加入下列混合液:
100ml
1M 磷酸钾缓冲液 PH6.0
100ml
10×YNB
2ml
500×B
100ml
10×GY
4 制BMMY 时,加入100ml 10×M取代10×GY
5 存于4 度,可放2个月
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