通过同源重组构建酿酒酵母新型表达质粒
本实验利用酿酒酵母内的同源重组建成了去除大肠杆菌质粒序列的外源基因表达质粒。 包含该表达质粒的工程菌对基因表达量有了显著提高。而质粒在细胞中的稳定性、拷贝数明显提高。 由于大规模发酵生产时细胞扩增的倍数大大增加，因此表达载体的稳定性对表达水平的影响将更为显著。 可以预计工程菌DCO4/pHC11R-INFα2b在大规模发酵条件下提高产物的表达量会有很大的潜力。 由于pHC11R-IFNα2b在构建中去除了一些非必需序列，载体明显缩小，较小的质粒DNA在细胞有丝分裂过程中易于扩散和均匀分配。总之， 我们利用同源重组构建酿酒酵母表达载体的方法，不依赖于限制性核酸酶的识别位点， 不会引入多余的序列，操作步骤简单、快速； 而经重组获得的不含细菌质粒抗药性标记序列的外源基因表达载体，不但在宿主菌中的稳定性和拷贝数有所提高，而且使酿酒酵母表达系统用于食品和药物的生产、应用更符合生物安全的要求；此外，在利用pHR系列载体构建外源基因表达载体时， 可以根据所要表达的外源基因的自身特性选择适当的表达方式，因而具有更好的通用性。
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本帖最后由 shiweiliu861 于 07-11-30 13:59 编辑 ]
