pPICHOLI Shuttle Vector SystempPICHOLI 穿梭载体系统pPICHOLI载体可以让异源基因在P. pastoris中表达，同时也能在原核的E.coli中表达。这个载体包含可诱导（酵母）的乙醇脱氢酶（AOX）启动子和E.coli T7启动子，这样就允许它可以在P. pastoris和E.coli中自主复制。因此，载体的线性化就不再是必需的了，而且，少量的DNA就可成功的转化P. pastoris。
由于PARS序列被整合到载体中，使从酵母中提取的质粒非常简单的实现复原。不需要将亚克隆转入一系列表达载体中，也不需对阳性菌株进行检测，而多克隆位点又使DNA片段很方便的连接到载体中。
特点：
1.
原核表达系统是一个易于操作、花费少，并且可得到高水平异源蛋白产物；
2.
P. pastoris/pPICHOLI 系统是一个强有力的真核表达系统，由于结合了AOX或CUP1启动子，使其可以快速生长。
3.
适合表达翻译后修饰的可溶性蛋白和不适宜在大肠杆菌中表达的蛋白（真核）（例如一些毒素蛋白）；
4.
容易克隆和高的转化效率；
5.
方便的亲和纯化和重组蛋白的检测。
The pPICHOLI vectors

pPICHOLI载体
穿梭表达载体pPICHOLI和pPICHOLI-HA结合了真核和原核启动子元件。噬菌体T7启动子，含有主要衣壳蛋白的核糖体结合位点，促进细菌的表达，它被放在P. pastoris启动子的下游。强的乙醇脱氢酶启动子（AOX）是被紧紧调控的，在含有葡萄糖的培养基中，蛋白表达是完全被抑制的，而生长在甲醇中，则可被最大限度的诱导。
pPICHOLI-1（3579bp）有两个G bases直接位于Sal位点的上游，pPICHOLI-2（3578bp）和pPICHOLI-3（3577bp）分别敲除一个和两个G bases。
pPICHOLI-HA载体含有一个HA（血球凝集素）抗原决定簇代替了生物素酰化序列。
pPICHOLI-C加进了酿酒酵母CUP1
启动子（代替了AOX启动子）。这个载体没有T7启动子，不适合原核蛋白的表达。
由于使用了共同的选择标记zeocin，这个穿梭载体仍然是小的（~3.6和3.2kb），因此，操作、克隆和转化都很方便。通过将Pichia特异的自主复制序列（PARS1）整合到pPICHOLI载体中，线性化不再是必需的，转化效率增加到105转化体/ug DNA。pPICHOLI双重表达载体包括一个RGS（His）6tag和一个生物素化序列，这样就使表达蛋白易于检测和快速的纯化。

order#	description	amount*
PPICH	pPICHOLI-1 vector DNA pPICHOLI-2 vector DNA pPICHOLI-3 vector DNA pPICHOLI-C vector DNA pPICHOLI-HA vector DNA sequencing primers	10 µg 10 µg 10 µg 10 µg 10 µg 500 pmole each

北京毕特博生物
小袁
yuanlei202@yahoo.com.cn

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