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hamye 于 07-12-24 12:25 发表
介绍一个自己做的包涵体的纯化过程。
大致策略为：尿素溶解包涵体---His柱复性兼纯化----EK酶切
过程很简单：
柱体积约10ml
1、首先用His binding buffer（含10M脲）溶解包涵体，0.45um滤膜过滤。
2、His柱上样，用binding buffer（含8M脲）平衡。
3、复性：梯度从100%的binding buffer（含8M脲）到100%的binding buffer（不含脲），20倍CV，流速2ml/min。
4、脱盐兼置换缓冲：分子筛脱盐，流动相为酶切buffer。
请问“3、复性：梯度从100%的binding buffer（含8M脲）到100%的binding buffer（不含脲），20倍CV，流速2ml/min。”这步中，是否添加过《包涵体复性》帖子中提到的促进剂，分子伴侣，折叠酶，人工伴侣之类的？“20倍CV”是指每个梯度稀释的倍数吗？我最近正在做Ni 柱的HIS-Tag蛋白纯化复性，表达出的包涵体想溶解后在柱上复性，没有相关经验，请指教，万分感谢！！！
