四个二硫键也不是很多吧。就我做的体会，先复性还是先纯化，不同的蛋白质可能会有所不同。有的蛋白质柱上复性好像效果也差，可以考虑稀释复性啥的。还是要多试试。
柱上复性主要是要注意复性的时间和流速，而稀释之类则主要考虑蛋白浓度，辅助复性因素如氧化还原系统等。

前面介绍了不少柱上复性的文献，这里介绍几篇稀释复性的文献。

1、Continuous refolding of lysozyme with fed-batch addition of denatured protein solution
     流加稀释复性的参考文献。

2、Optimized Procedure for Renaturation of Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-2 at High Protein Concentration
      要点：为了解决稀释复性中蛋白浓度需要控制在很低水平的问题，提出了脉冲流加稀释复性的策略，其实质我认为为将多次复性操作在一个系统中分多步完成。

[ 本帖最后由 hamye 于 08-3-20 12:17 编辑 ]

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原帖由 hamye 于 08-3-18 12:32 发表
四个二硫键也不是很多吧。就我做的体会，先复性还是先纯化，不同的蛋白质可能会有所不同。有的蛋白质柱上复性好像效果也差，可以考虑稀释复性啥的。还是要多试试。
柱上复性主要是要注意复性的时间和流速，而稀释之类则主要 ...

谢谢版主帮忙。这段时间可能都会麻烦你，有空帮我解答问题啊！o(∩_∩)o...！
先谢谢了！

楼主太帅了，发的帖子个个经典

十分感谢楼主给出如此丰富的资料

这里真是人杰地灵啊！

请问楼主做过杆状病毒蛋白纯化吗？
就是细胞裂解液怎么纯化 啊

这个主要要看你过什么柱子。如果是离子交换柱，一般没什么问题，保证样品的离子浓度即盐浓度不要太高就行了。如果过疏水则要加盐提高离子浓度。
还有就是裂解液的缓冲体系最好和过柱用的平衡缓冲一致，不一致的话就用平衡液稀释一下就可以了。
当然上样前过滤是必须的阿。

感谢楼主分享

感谢，感谢，楼主真强！