以下方案供选择：
1、分子克隆第三版p1256 有很详细的操作步骤，包括注意事项。
2、不知道你的标签是什么，如果是GST，则建议你考虑调整诱导条件（低温、增大通气、短时诱导），因为后面复性很麻烦的，挂不上柱并且效率低。

介绍一个自己做的包涵体的纯化过程。

大致策略为：尿素溶解包涵体---His柱复性兼纯化----EK酶切

过程很简单：
柱体积约10ml

1、首先用His binding buffer（含10M脲）溶解包涵体，0.45um滤膜过滤。
2、His柱上样，用binding buffer（含8M脲）平衡。
3、复性：梯度从100%的binding buffer（含8M脲）到100%的binding buffer（不含脲），20倍CV，流速2ml/min。
4、脱盐兼置换缓冲：分子筛脱盐，流动相为酶切buffer。
5、酶切。

电泳图：
图一的顺序为：上样、透过、5%B、透过、100%B、100%尾、M
图二的顺序为：1.2为酶切前，3.4为酶切后，后面为别的蛋白。

Thank you very much!!!

资料真是不错，谢谢啦 ^_^

呵呵，谢谢啊

好贴，谢谢，学习学习

又长知识啦! :excellent:

多谢

看文献好多都是先复性，然后再上柱纯化。可是看楼主的建议，好像是先纯化，再复性，或是在柱上复性。不知哪种方法更好一些？

我做的是一种酶在大肠杆菌中的高效表达，形成包涵体。但电泳图效果不明显，所以打算往下做，纯化出来再看。我的这种酶预测含有四个二硫键，看文献说复性挺复杂而且复性效率还不高。希望楼主在选柱和包涵体的复性方面给我提点建议，谢谢！
PS：可能问的有点大，但是现在我真找不出头绪，望见谅！希望得到楼主的帮助。