威望、酷币、资源币获取方法及用途
基因酷保藏中心资源获取规则
保藏中心资源获取流程详细说明
基因酷保藏中心资源进出明细
领取红包获得资源币和威望
各版诚拜版主,每版欲聘5名
生物科研网址导航使用说明
生物科研网络助手使用说明
基因酷资源免费,望您点击广告
来支持基因酷
基因酷大事件回顾
论坛使用说明及酷友指南
基因酷FTP的使用及说明
基因酷个人空间(博客)使用帮助
邀请您参与《生物信息学分析系列图书》编写
祝贺酵母共享平台的建立,征集细胞株共享实验技术支持!
科研文献、资料分享交流倡议
基因酷网络资源调整公告!
情系灾区,奉献爱心
发新话题
打印

[蛋白质纯化与鉴定] 蛋白质纯化及复性的系列文献及资料(2008.3.18 42楼更新)

本主题由 nano 于 07-12-10 21:42 加入精华 
分子筛考虑过,不过上样量不能太大,我又不想浓缩。

呵呵,先考虑下别的办法啊。

TOP


个人感觉差不多啊,变性的包涵体溶液一般浓度都挺大的,洗下来的东西一般也不比稀释复性浓度低,就是分子筛装柱挺烦人,我也讨厌用

TOP


最近的进展呢?要把它顶起来啊。^_^
付出总有回报,努力会有结果!

TOP


谢谢flash关心哈。我是不敢忘记的,最近又点忙,所以、、、、
似乎有找借口的嫌疑阿。

今天介绍的这篇文献,我也才大概看了一下,不过感觉很不错,跟以前看过的文献相比,呵呵,杰作阿。
还是先把题目写下来:Three-step purification of lipopolysaccharide-free, polyhistidinetagged recombinant antigens of Mycobacterium tuberculosis

摘要:
Previous work has shown that the study of host immune responses against Mycobacterium tuberculosis, the causative
agent of tuberculosis, requires the availability of multiple mycobacterial antigens. Since purification of protein from M.
tuberculosis cells is extremely cumbersome, we developed a protocol for purifying milligram amounts of ten recombinant antigens of M. tuberculosis from E. coli cells. Purified proteins were immunologically active and free of contaminants that confound interpretation of cell-based immunological assays. The method utilizes a three-step purification protocol consisting of immobilized metal-chelate affinity chromatography, size exclusion chromatography and anion-exchange chromatography.The first two chromatographic steps yielded recombinant protein free of protein contaminants, while the third step (anion-exchange chromatography) efficiently removed E. coli lipopolysaccharide, a potent polyclonal activator of lymphoid cells. The recombinant proteins were immunologically indistinguishable from their native (i.e., purified from M.tuberculosis) counterparts. Thus the method provides a way to utilize recombinant proteins for immunological analyses that require highly purified antigens. Ó 1998 Elsevier Science B.V. All rights reserved.

尤其向大家推荐看一下文章的结论部分,作者对为什么选择这样的纯化策略做了详尽的分析,读了受益匪浅阿。从这篇文章中我们可以看出根据自己的试验目的和要求(即自己需要的样品纯度),设计纯化方案。

如果有兴趣大家把读后的感想说一说,讨论讨论,也可以说一说自己在做纯化时,一般根据什么来设计纯化策略,如何优化以达到最大的效果。
附件: 您所在的用户组无法下载或查看附件

TOP


恩     我也跟着学了一些

TOP


先看下先,再根据自己的感受好好体会体会~~

TOP


大家有过跨等电点调pH的么?
我想把一个蛋白溶液的pH从等电点上面调到下面去,自己调了一次,全部沉淀了,是不是我调的不够快啊?
我原来是想在低pH的条件下过source 30RPC;查了一下,高pH和低pH都可以做反相,所以也不用调了。不过还是想了解一下怎么跨等电点调pH,网上查了下也没查到。

TOP


真是好东西,谢谢!

TOP


学习了!
谢谢!

TOP



回复 9# 的帖子

请问斑斑怎么洗包涵体体啊

TOP

发新话题