蛋白透析复性始终析出，求助大家！
我在ｐＥＴ２８载体上克隆了一个蛋白，导入ＤＥ３诱导表达后主要以包涵体形式存在。为了得到纯酶考虑走包涵体溶解再透析复性，然后过Ni-NTA柱的纯化路线。
第一次透析，只是大致摸条件，做的粗放，包涵体溶于８Ｍ尿素后直接透析到４Ｍ，然后０Ｍ尿素。结果在从４Ｍ到０Ｍ时大量蛋白析出。
第２次透析，极其小心，平缓降低尿素浓度：8m-6m-4m-2m－０Ｍ，前面一切正常，换最后一次透析液即2m－０Ｍ时蛋白突然在几分钟内出现析出，看着期盼了几天的蛋白转瞬间不可逆的沉淀析出，我的心那个疼啊！请问大家有什么办法让蛋白安全复性出来吗？具体透析条件如下：
从５０ｍｌ诱导表达的菌体得到的包涵体经过洗涤，溶解于１ｍｌ含８Ｍ尿素的ｐＨ６.４磷酸钾缓冲液，离心后放入透析袋开始透析，
透析液母液：Ｔｒｉｓ１０ｍＭ；ＮａＣｌ ５０ｍＭ；甘油 ５％；甘氨酸 １％（助溶），然后按５００ｍｌ量分别配置6m-4m-2m－０Ｍ透析液，ｐＨ均调到８.０。
我能想到的就只是下次透析增加从２Ｍ－１Ｍ这一步，只怕还是会析出来啊，如果那样该怎么办呢？
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