引用:

原帖由 yaoyl0679 于 08-7-11 21:14 发表
做过这个PCR，不过这个也不是绝对能够做出来的，也跟基因序列组成有关，也是有随机性的

说得不错，不过做不出来并不是方法问题，可能在SITEFINDER末端序列上有文章可作，没深入研究，只能说可能

好长时间了，得到没？我email给你。马上

我是该文的第一作者，已经更新了SiteFinder。将原来的NotI位点换成了Sse8387I, 使用新的SiteFinder只需要两轮扩增，可以得到更好的结果，产物可以直接用GSP-3测序。如果在国内用的话，最好用天为时代的Long Taq和宝生物的LA Buffer I。
Sitefinder：
5'-GACACGCTACTCCAACACACCACCTCGCACAGCGTCCTCAAcctgcaggI(TGC)I(ATC)IGCTC-3' (Sse8387I)

SFP1： 5'-GACACGCTACTCCAACACACCCA-3   (Tm:64 )
SFP2： 5'-CTCCAACACACCACCTCGCACA-3  (Tm:66 )
SFP3： 5'-CACCTCGCACAGCGTCCTCAA-3   (Tm:66 )

Good luck!

支持先，正在讨论

下载了好长时间没下载完，麻烦发个，邮箱，zaiqifengyun@yahoo.com.cn
谢谢。

本人想尝试一下sitefinding-PCR,但对其原理和方法不是很了解，望各位高手指导一下，将不胜感激！

我也想用该方法，现在怎么和作者联系，我的地址是bjmaxiqing@163.com,谢谢！

楼在真是好人阿