6.
1酶联免疫法
2胶体金标法
酶联免疫法的主要操作步骤：
标本收集
1.用无菌静脉采血程序采集的新鲜血清和正确保存的血清可用在本试剂盒上。不需添加任何抗凝剂或进行预处理。避免使用溶血标本，脂质标本或微生物污染的血清。
2.室温（20－25℃）下保存标本不要超过8小时。2－10℃保存血清，不超过48小时。如耽搁的时间更长，请在-20℃或更低的温度下保存标本。标本避免多次冻融，这样可能会损失抗体活性，产生错误结果。
准备工作
1.将酶标板和实验用的试剂平衡到室温。
试验过程
1.取出所需板条，其余仍密封放回2-8C。
2.加入50ul阴性对照、50ul阳性对照、50ul待测样品于相应孔中。
3.每孔加入酶联物50ul,轻轻混匀，37C 45分钟。
4.洗板：甩尽孔内液体，每孔加入洗涤液350ul,静止30秒后甩尽液体，在厚叠吸水纸上拍干，洗4次。再用双蒸水洗一次，甩尽拍干。
5.每孔先加入底物A 50ul,再加入底物B液50ul, 轻轻混匀，37C 30分钟。
6.每孔加入终止液50ul，混匀，即刻在450nm处读数。
结果判断
判断值=阴性对照的OD值× 2
阳性：标本的OD值≥判断值；
阴性：标本的OD值<判断值。
7.
免疫双相扩散法
操作步骤如下：
1、1%离子琼脂配制及倒板：
称 1克琼脂糖或日本琼脂粉，加入100ml0。05UpH8。6巴比妥-HCL缓冲液中，水浴下加热至完全融化，取3ml倒在普通载玻片上﹙2。5x7cm﹚，待凝胶凝固后，放4℃存放20min以上可打孔使用。不用琼脂凝胶加入20mgNaN3，混匀后3ml-分装于4℃保存备用。
2、打孔加样:
用 3mm打孔器打孔，孔径3mm，孔距3～5mm的梅花瓣孔图。注意不要把孔打裂，及漏底现象。当测抗体效价或活性时，抗体对倍稀释后加在四周孔，抗原加在中间孔，每孔10ul。各种IgG抗体，对应抗原可用正常血清1：40～50PBS稀释作抗原。
3、结果观察:
加好样品的双扩板，放 37℃温箱24～48小时，观察结果，最好对着日光灯观察。最大稀释度抗体孔的沉淀线为抗体效价或活性。沉淀线随着抗体的稀释，逐渐靠近抗体孔边。
