求助有关共转染的问题!!!
各位老师,
大家好,
我在做RNAi方面是新手,现在已经构建好载体,正准备转染,我选用的载体是ambion的Psciliner3.1H1-neo, 说明书上说质粒里面带有GFP的干扰序列,需要用带有GFP的质粒共转染来做阳性对照,我对这方面现在还不太明白,我想请教一下各位老师对于这个带有 GFP的质粒的选择有什么具体要求吗?另外有哪些质粒是专职表达GFP的呢?各位老师谁那是否有相关的质粒没有,是否可以赠送我一些?
另外还想请教各位一个比较低级的问题,如果我的shRNA表达载体里面不带有GFP这样的基因,那么判断它到底有没有转染进入细胞用什么办法 呢?G418筛选好像是进行长期稳定转染用的,但是我用的正常的组织细胞,可能稳转比较困难,那么我在48小时以内如何判断质粒已经转入细胞了呢?
本人初接触RNAi,还有好多不太懂的地方,希望各位老师不吝赐教!谢谢!
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