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请问根据mRNA的序列如何设计引物扩增该基因，谢谢！

1^# 大中小发表于 07-10-31 21:32 只看该作者

请问大家根据mRNA的序列如何设计引物扩增该基因，我现在正准备克隆这个基因，还有就是现在分离得到了四种蛋白酶原并知道了其中两种的N段氨基酸序列，我看了一些资料，这四种蛋白应该是由四种mRNA编码，但苦恼的是不知道如何来确定其基因。请做过这方面研究的朋友指点迷津！谢谢！

曲终人散尽，江上数峰请。

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纤夫

2^# 大中小发表于 07-11-9 09:07 只看该作者

既然分离得到了四种蛋白酶原，能否去做下质谱，分析其氨基酸序列后，可以对其编码基因进行初步判断。个人意见，呵呵

。

生命诚可贵，实验价更高。

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yf-deng

3^# 大中小发表于 07-11-9 21:13 只看该作者

多谢指导！

曲终人散尽，江上数峰请。

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nano

4^# 大中小发表于 07-11-10 08:33 只看该作者

有mRNA序列就直接按照载体设计引物，提RNA做RT就行了，至于设计引物的具体方法论坛内有
如果N端序列已知，真核基因可以通过设计兼并引物，加上OLIGO(dT)扩增，如果得到了该序列，再做RACE验证RNA5'端序列，得到真实的mRNA序列
没做过原核的，不知道怎么调只知道一端aa序列的基因

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yf-deng

5^# 大中小发表于 07-11-13 15:44 只看该作者

谢谢版主，我自己捣鼓很久了，还是没有什么头绪，师兄上班了，其他师兄师姐都忙着考公务员了。

曲终人散尽，江上数峰请。

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