我有一个同事坚持认为用紫外分光光度计在A280处只能测定天然蛋白（如抗体）的浓度，而不能测定基因工程重组表达的抗原的浓度．请问各位前辈他的说法正确吗？如果他的说法正确，那么该怎样才能测定基因工程表达的重组蛋白抗原的浓度呢？

紫外光谱吸收法测定蛋白浓度
1．原理  本法根据蛋白之中的芳香族氨基酸－色氨酸、酪氨酸在紫外光区的吸收特点而建立的。蛋白质在280nm波长附近有一吸收峰，其吸收程度与这些氨基酸的含量成正比。此法灵敏度高，可测到微克水平，操作简单，不需要加各种试剂，测完后，样品可回收。
    2．标准曲线的制备
    ⑴ 用精密天平称取牛血清白蛋白50mg，溶于50ml生理盐水中。
    ⑵ 以生理盐水再稀释成每ml含0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg……0.9mg，以盐水对照。
    ⑶ 测各管OD280值。
    ⑷ 以OD280值为纵坐标，蛋白含量为横坐标，绘制标准曲线。
    3．样品测定
将待测样品以盐水适当稀释，在0.10mg/ml~1.00mg/ml之间，以生理盐水为对照，测OD280值，从标准曲线上查出蛋白含量。
基因工程表达的重组蛋白也一样能测，不过一定要纯度高否则测的不准，尤其不能含有DNA和RNA

这方法就是检测共轭双键，只要有共轭双键的东西都能检测，但是要注意这个方法最好只用于对比同一种蛋白，因为不同蛋白之间带芳香环的AA含量不同

感谢楼上2位前辈的帮助~~肯耐心回答我这个比较菜鸟的问题哦.我现在一般用的方法是(也不知道是否正确,我就厚着脸皮抖出来了,即使这个方法不对,也能给大家提个醒,呵呵):用0.02MPB在OD260处调0,而后把波长调到280处,用0.02MPB对样本进行20或50倍稀释,在OD280处读取吸收系数,用公式:C(浓度)=OD280系数 X 20/50(稀释倍数) X 0.75(参数,不知怎么计算出来的...希望知道的朋友告诉下,谢谢),这个方法和计算公式和楼上的前辈不太一样,可能与我用的机器型号和新旧有关,我用的那台比较老了..
    我最近用这个机器和方法测了一个基因工程重组蛋白cagA-GST的浓度,结果是8.47,而标签上写的浓度是2.8mg/ml...我挺纳闷,现在也没分析出为什么结果不一致,,
    还有就是我把一管在4度保存了一年多的鼠抗人IgM单抗(腹水制取)进行了一下处理,小型离心机10000rpm离心了60min,我没有离心机的说明书,计算不出离心力,但大致估计了一下IgG是离不下来的,去除了杂蛋白,然后依上法进行浓度测定,结果是8,875mg/ml,而原来管子上标的是5.45mg/ml...
这2个不一致的地方我不明白是为什么...可能是不是像楼上前辈说的那样,有核酸或其它不明物质的污染及纯度不高造成的.请问该如何解决这样的测不准原理呢?

对于你测出的这两个结果，是否真实无法验证！因为你不知道消光系数，你要先确定你要测的蛋白的消光系数，然后你在280nm下测得的值除以这个系数才是蛋白的浓度，而你测出的只是280nm下的吸光值并不是浓度，你第一个值我个人认为里面会有核酸的污染，因为基因重组的蛋白在纯化的过程中无法将核酸分离，建议你通过一个已知的检测物反推它的浓度。而你测的第二个，我个人认为，你应该再找个这种蛋白测下看看！

我给你推荐一个检测蛋白的方法你可以试试！
这个方法现在有商品化的试剂盒
原理简介
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。众所周知，二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子（biuret reaction），一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
产品特点
1．步骤简单，45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。
2．灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl 。
3．BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。
4．在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
BCA蛋白质定量检测试剂
在蛋白质的表达纯化，结构和功能的研究工作中，蛋白质的定量随处可见。但是，什么是理想的蛋白质定量方法？如何准确、快速的对蛋白质进行定量，对于不同的样本，如何选取相应的蛋白质定量试剂和方案？如何避免实验中引入的其它物质对蛋白质定量的干扰，PIERCE为这一切提供了可以信赖的解决方案。
PIERCE的BCA(bicinchoninic acid)蛋白质检测试剂是当前比Lowry法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠且对不同种类蛋白质变异系数甚小而深受专业人士的青睐。其中MicroBCA产品可检测到0.5μg/ml的微量蛋白，是目前已知的最灵敏的蛋白质检测试剂之一。
主要特点：
• 准确灵敏：BCA试剂的蛋白质测定范围是20－2000μg/ml,采用加强方法可检测到
5μg/ml；MicroBCA试剂测定范围是0.5-20μg/ml。
• 快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。
• 经济实用：除试管外，测定可在微孔板中进行，大大节约样品和试剂用量。
• 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
• 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考玛斯亮蓝。
基本原理：
碱性条件下，蛋白将Cu++还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度