
去内毒素(转染级)质粒提取
除了氯化铯和试剂盒,又有了新的选择——精胺法。这个方法是在别的论坛上看到了,当时看到底下的跟帖是褒贬不一,有的说方法好,有的说成本高,还有的说亲自做了根本纯化不到质粒。呵呵,本人苦于实验室超速离心机坏了,试剂盒又太贵,所以买了一点精胺(Sperming-4HCl,Sigma)试了试,最后结论得率还行,纯度够转染,成本并不贵。具体方法是参照一篇文章,贴在附件中。
个人的建议:1.得率不如氯化铯,但不用超速离心,不用EB,不用酚,有4度高速离心机足矣——对实验室条件要求比较低;
2.成本,Spermine-4HCl,Sigma的是1g 500人民币左右,1g可以配成190mL的10×储存液,500mL的菌液最后只要500uL10×储存液,一次成本1块3多一点,加上其他药品(溶液I II III , LiCl……) 成本肯定不超过2块,比目前大部分的试剂盒便宜的多,至于和氯化铯的成本,不太清楚。
3.最好还是买Sigma的,前面提到的论坛上,有兄弟说用生工(1g200左右)的根本沉淀不下来,个人没敢去试,如果有兄弟用生工的能做出来,请回帖一下,呵呵,成本会进一步下降。
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