威望、酷币、资源币获取方法及用途
基因酷保藏中心资源获取规则
保藏中心资源获取流程详细说明
基因酷保藏中心资源进出明细
领取红包获得资源币和威望
各版诚拜版主,每版欲聘5名
生物科研网址导航使用说明
生物科研网络助手使用说明
基因酷资源免费,望您点击广告
来支持基因酷
基因酷大事件回顾
论坛使用说明及酷友指南
基因酷FTP的使用及说明
基因酷个人空间(博客)使用帮助
邀请您参与《生物信息学分析系列图书》编写
祝贺酵母共享平台的建立,征集细胞株共享实验技术支持!
科研文献、资料分享交流倡议
基因酷网络资源调整公告!
情系灾区,奉献爱心
发新话题
打印

[免疫学实验技术] SYBR绿色荧光染料I

本主题由 人人为我 于 08-3-20 16:42 分类 

SYBR绿色荧光染料I

那位大虾能帮我解释一下SYBR绿色荧光染料I的特点。谢谢

TOP


SYBR染料为一种非对称菁化物,它作为一种DNA和RNA染料,与菲啶类染料如溴化乙锭相比具有一定优越性。
  有三种SYBR染料被用于分子生物学试验中:分别是SYBR GreenⅠ、SYBR GreenⅡ和SYBR Glod。
SYBR Green I核酸染料(电泳用)
   
    SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单:无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低。可适用于多种电泳分析。
  SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法:琼脂糖凝胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳,脉冲电场凝胶电泳,和毛细管电泳等。
  SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高,因此可以用做电泳前染色,对分子生物学中常用的酶(如:Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等)没有抑制作用。另外,SYBR Green I 与EB相比,诱变能力大大降低。

SYBR Green I 核酸染料特点
  高灵敏:至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。
  信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
  操作简单:无须脱色或冲洗。
  适用范围广:可适用于多种电泳分析。
  使用方便:不影响其它修饰酶作用。
  经济:价格比银染便宜。

电泳用SYBR Green I 使用方法
SYBR Green I预染方法
1. 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳
2. 工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍,即为SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。
3. 制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
4. 样品染色:向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。
5. DNA Marker染色:将5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混匀,室温放置5分钟,使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。
6. 上样、电泳:按常规操作。
SYBR Green I后染方法
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用PH 7.0 - 8.5 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照10000:1的比例稀释SYBR GreenⅠ浓缩液,混匀,制成染色溶液。
3. 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上,让工作液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
4. 用蓝盾TM观测。蓝光可透过玻璃,观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入蓝盾TM内观测。
SYBR Green I使用注意事项
1. 在"SYBR GreenⅠ预染色方法"中,电泳时间不要超过2小时,否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带。
2. 在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SYBR Green I 可以全部从双链核酸上去掉。
3. 如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行 Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液中加入 0.1%- 0.3% 的SDS。
4. 在紫外照射透视下,与双链 DNA 接合的 SYBR Green I 呈现绿色荧光。如果胶中含有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。
5. SYBR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
本帖最近评分记录
  • WANZHAN 威望 +1 精彩解答 07-10-22 17:35

TOP

发新话题