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phyllis03 发表于 07-8-22 15:51

抗体的纯化

[align=center][b]抗体的纯化[/b][/align][font=宋体][size=3][/size][/font]
,C,F$@4BdO [font=宋体][size=3]主要内容：FjrHU-}6@o3V-p
[/size][color=blue][size=11pt]1[/size][size=11pt]．[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8716&page=1#pid32790]盐析法[/url][/size][/color][/font]2]oxHK'?7Y
[color=blue][font=宋体][size=11pt]2[/size][/font][font=宋体][size=11pt]．[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8716&page=1#pid32791]冷酒精沉淀法[/url][/size][/font]
2m`p&`a]?t^4} [font=宋体][size=11pt]3[/size][/font][font=宋体][size=11pt]．[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8716&page=1#pid32792]deae-sephadex a-50 柱层析法[/url][/size][/font]
2J/`0ym[i [font=宋体][size=11pt]4[/size][/font][font=宋体][size=11pt]．[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8716&page=1#pid32793]SPA-sepharose cl-4b 亲合层析法[/url][/size][/font]t|\7J[Oq2e
[font=宋体][size=11pt]5[/size][/font][font=宋体][size=11pt]．[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8716&page=1#pid32794]高效和液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体[/url][/size][/font][/color]
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phyllis03 发表于 07-8-22 15:52

盐析法

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2B l0] Tli8d|v [[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 21:07 编辑 [/i]]

phyllis03 发表于 07-8-22 15:53

冷酒精沉淀法

**** Hidden Message *****
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:l;p8w3?-R$I;NR:E [[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 21:08 编辑 [/i]]

phyllis03 发表于 07-8-22 15:54

deae-sephadex a-50 柱层析法

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phyllis03 发表于 07-8-22 15:57

SPA-sepharose cl-4b 亲合层析法

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phyllis03 发表于 07-8-22 15:59

高效和液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体

[align=center][b]高效和液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体[/b][/align]\.Pxv%VcRw L
　　从小鼠腹水中纯化mcab的方法有盐析、离子交换层析、凝胶过滤和亲合层析等。应用tsk deae-spw离子交换层析柱从小鼠腹水中纯化mcab不仅纯化速度快，回收率和得率高 ，而且保持良好的生物学活性。j(RpWR
原理
:?\R(pP[$r 　　根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含mcabγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗 脱液中的离子强度，洗脱并收集蛋白峰。
}!hoW|9X [b]试剂和器材[/b]"S rYFnc2wl'K
（1） tsk deae spw离子交换层析柱 （75mm×7.5mm,bio rad）
!^Q E9\!z （2） 高效液相色谱仪（包括控制系统、溶剂传递系统、高压加压活门和紫外280nm监测系统）
O}0a$VP7u-u （3） PBS，缓冲液a和b。Y(nkz`s
[b]操作步骤[/b]
/iI3ChF5T1j 腹水离心10000 g,10min，除去细胞和杂质，在4℃下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，使终浓度为40%饱和硫酸铵4X1r0A2A\
↓搅拌20～30min
},cIzi u'EI S 离心，沉淀用40%饱和硫酸铵洗涤2次后溶于PBS，对缓冲液a（pH8.5, 20mmol/l tris缓冲液）透析除盐
-y9[?1s|F ↓4℃过夜
4R3jdFI%Q#sXq z 用带有1000μl样品环的高压加样活门将透析后粗提物加样于经缓冲液a液平衡的tsk deae spw离子交换层析柱#ZL3b$hs7?i z.F:Zb
↓
)Y?A*w,zs | 洗脱流速1ml/min)oi
{_-A8yu
0～1min ：0→5%缓冲液b（20nmol/l tris, pH 8.5,含2.0 mol/l醋酸钠）QY4u-k^&\h|
1～2 min( 线性梯度洗脱)：5→20%缓冲液bd3c,JJMC"M
20～22min：20→0%缓冲液b0F'x^GO-YS]9m|
↓
b/^/U"f
I(s 洗脱液用紫外280nm进行监测2P l8F,b6E
↓
~A2Q uD?^k 收集蛋白峰，进行含量、纯度和活性测定!j+C)G^_wLj
[b]注意事项[/b]vA0M!`vK
（1） 所用缓冲液和加样粗提物均需0.2μm滤膜过滤。
krD_L （2） 在本实验条件下，IgG1峰一般在线性梯度洗脱开始11-12min。但不同类和亚类抗体以及不同特异性mcab 的存留时间（retention time）有所差异。

Bobbyzb 发表于 07-11-11 03:23

好东西一起分享.谢谢:hug:

pangtuzi 发表于 07-12-26 22:20

:excellent:  多谢

bobocj 发表于 08-1-10 10:28

资料太好了!
QD!Uu}r5b   谢谢!!!!

yuqing-8277 发表于 08-2-27 16:55

资料太好了!  谢谢!!!!

zhangning 发表于 08-5-29 20:30

:excellent: 感谢！！！！！！！！:qq68:

freetosoar 发表于 08-6-25 22:49

:excellent:

chenjihong 发表于 08-8-6 14:22

学习一下，谢谢楼主分享！

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