基因酷 基因库 Genecool » 基础实验技术 » 真核细胞表达系统

microfox 发表于 07-8-20 09:56

真核细胞表达系统

[align=center][b][font=Tahoma][color=#333333]真核细胞表达系统[/color][/font][/b][/align]Q[G&A2\5s
[b][font=宋体][size=3]主要内容[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]:[/font][/size]I3gzx'P J
[/b][size=11pt][font=Times New Roman]1[color=blue].[/color][/font][/size][font=宋体][color=blue][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8294&page=1#pid32168]真核细胞表达系统简介[/url][/size][/color][/font][size=11pt][/size]
f#A laJbWz [color=blue][size=11pt][font=Times New Roman]2.[/font][/size][font=宋体][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8294&page=1#pid32169]哺乳动物细胞表达系统研究[/url][/size][/font][size=11pt][/size]
HW/x/kN)d [size=11pt][font=Times New Roman]3.[/font][/size][font=宋体][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8294&page=1#pid32170]昆虫杆状病毒表达系统研究[/url][/size][/font][size=11pt][/size]6M1c Ba|3o
[size=11pt][font=Times New Roman]4.[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8294&page=1#pid32171]CHO[/url][/font][/size][font=宋体][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8294&page=1#pid32171]细胞表达系统与酵母细胞表达系统比较[/url][/size][/font][size=11pt][/size]
$x2wVL6_ [size=11pt][font=Times New Roman]5.[/font][/size][font=宋体][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8294&page=1#pid32172]真核细胞表达外源基因步骤[/url][/size][/font][size=11pt][/size]
Vu6K ~6Uj [size=11pt][font=Times New Roman]6.[/font][/size][/color][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8294&page=1#pid32173][font=宋体][color=blue][size=11pt]真核细胞表达外源基因技术[/size][/color][/font][size=11pt][/size][/url]
srg%{HR(Hw [color=blue][size=11pt][font=Times New Roman]7.[/font][/size][font=宋体][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8294&page=1#pid32181]真核细胞常见表达载体[/url][/size][/font][size=11pt][/size]v'fM"s'p4z+Wj$Df
[size=11pt][font=Times New Roman]8.[/font][/size][/color][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8294&page=1#pid32182][font=宋体][color=blue][size=11pt]真核表达外源基因的调控[/size][/color][/font][size=11pt][/size][/url]L)}V8or#Vb"T
[color=blue][size=11pt][font=Times New Roman]9.[/font][/size][font=宋体][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8294&page=1#pid32183]真核细胞表达转录水平调控[/url][/size][/font][size=11pt][/size]1u$l)C Q&?+cj+_|
[size=11pt][font=Times New Roman]10.[/font][/size][font=宋体][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8294&page=1#pid32184]真核生物表达翻译水平的调控[/url][/size][/font][size=11pt][/size]
5h`_VkU)a"w [size=11pt][font=Times New Roman]11.[/font][/size][font=宋体][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8294&page=1#pid32185]真核细胞表达系统应用及发展[/url][/size][/font][/color]UM{-{A~Y
V
[font=宋体][/font]1j-D:A?$z3?
[b][font=宋体][size=11pt]声明：[/size][/font][/b]
j N;s*g%m#R(r|,T,{kJ*Z [size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]、本篇涉及的资源主要源于网络及相关书籍，由酷友搜集、分析、整理、审改，供大家学习参考用，如有转载、传播请注明源于基因酷及本篇的工作人员；若本篇侵犯了您的版权或有任何不妥，请[/size][/font][font=Times New Roman][size=11pt]Email [/size][font=Tahoma][color=#000000][size=11pt][email=genecool@126.com]genecool@126.com[/email][/size][/color][/font][/font][font=宋体][size=11pt]告知。[/size][/font]
Tq-N4grJ{ h [size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]、由于我们的学识、经验有限，本篇难免会存在一些错误及缺陷，敬请不吝赐教：请到基因酷论坛（[/size][/font][font=Tahoma][color=#000000][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs]www.genecool.com/bbs[/url][/size][/color][/font][font=宋体][size=11pt]）本篇对应的专题跟贴指出或[/size][/font][font=Times New Roman][size=11pt]Email [/size][font=Tahoma][color=#000000][size=11pt][email=genecool@126.com]genecool@126.com[/email][/size][/color][/font][/font][font=宋体][size=11pt]。[/size][/font]
8wDw x5v4y:V [b][font=宋体][size=11pt][/size][/font][/b]QL5Y!P}t:L}lt
[b][font=宋体][size=11pt]致谢：[/size][/font][/b]
7LCX*|/Dy(q Qvi [font=宋体][size=11pt]整理者：[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]microfox          [/font][/size][font=宋体][size=11pt]审改者：小宝[/size][/font]-IZMe7es}0a?
[size=11pt]y&}iG~yA
[font=宋体][size=11pt]主要参考资料：[/size][/font][size=11pt][/size]
p9z tYA6L [font=宋体][size=11pt]《真核基因表达调控[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]([/font][/size][font=宋体][size=11pt]修订版[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman])[/font][/size][font=宋体][size=11pt]》[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]沈珝琲，方福德[/size][/font][size=11pt][/size]6}}_h)k U+M
[font=宋体][size=11pt]《[/size][size=11pt]真核表达系统的研究进展[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman][font=宋体]》 [/font][/font][/size][font=宋体][size=11pt]浙江省医学科学院学报[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2003[/font][/size][font=宋体][size=11pt]年[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]9[/font][/size][font=宋体][size=11pt]月[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]([/font][/size][font=宋体][size=11pt]总第[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]54[/font][/size][font=宋体][size=11pt]期[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman])   [/font][/size][font=宋体][size=11pt]经络，陈勇[/size][/font][size=11pt][/size]:{F(iE8zM/d
]%[rsCmK
DIU+]+s(q a8J/f7J
[/size]Z%~(@8\zWh
x(nQx Z8|?'Xk
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-14 09:07 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-20 10:01

真核细胞表达系统简介

[align=center][b]真核细胞表达系统[/b]X
Hi_6]4x"g8W
**** Hidden Message *****a(H e8bj3h*V
H I(qit%X
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 09:27 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-20 10:05

哺乳动物细胞表达系统研究

[align=center][b]哺乳动物细胞表达系统
"Ug:n,a%X **** Hidden Message *****
AIL$F MC+c
S*I~H_} g3sC+tG [[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 09:29 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-20 10:13

昆虫杆状病毒表达系统研究

**** Hidden Message *****
C0r&T/ASQf6K
L2B,}k:S ym [[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 09:29 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-20 10:15

CHO细胞表达系统与酵母细胞表达系统比较

[align=center][b]CHO细胞表达系统与酵母细胞表达系统比较[/b]
ZEj^"tAU@M#j **** Hidden Message *****
/wk~B#u{G F$T |'tb|)G8o
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 09:30 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-20 10:23

真核细胞表达外源基因步骤

[align=center][b]真核细胞表达外源基因步骤
K.QfK3Y-f **** Hidden Message *****bc_9f~(t ?o

)I1G O'K0vt] G [[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 09:31 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-20 10:28

真核细胞表达外源基因技术

[align=center][b]真核细胞表达外源基因技术$U2m$P%N#Jjz Y8o
**** Hidden Message *****.n{5A"qIp8zw


~+_u r.w [[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 09:32 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-20 10:46

真核细胞常见表达载体

[align=center][b]真核细胞常见表达载体[/b]
m(b9Qds **** Hidden Message *****pJ6V7l8U!z]9k-@

(}h2?J!Q yE L7g0T i [[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 09:33 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-20 10:49

真核表达外源基因的调控

**** Hidden Message *****
#b#u'R;Ya0M\G
M'Scw|'X+TS [[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 09:33 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-20 10:55

真核细胞表达转录水平调控

[align=center][b]真核细胞表达转录水平调控[/b]
Vu6oJL **** Hidden Message *****
a
`Oz;jk
Dbh7[ g
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 09:35 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-20 10:59

真核生物表达翻译水平的调控

**** Hidden Message *****5g6D-q-qW.`
v
[5vTEd;I }bLf
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 09:35 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-20 11:02

真核细胞表达系统应用及发展

[align=center][b]真核细胞表达系统应用及发展
&~bR#~6W [/align][/b]
@x
y{{:bAG f\ [b]应用[/b],b.Oj4H,z0t
       真核细胞表达系统的诸多优势使其近年来的应用范围大大加宽，表达的蛋白质包括酶、膜蛋白、抗原和抗体、调节蛋白等各种类型。
2}9tKe:{4d/PL        目前使用较多的是甲醇酵母系统，由于该表达系统的诸多优点，人们越来越多地利用它作为外源基因的表达系统来生产目的蛋白。自1987年Gregg等首次在毕赤酵母中表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)以来，国内外已有数百种外源蛋白获得表达。有代表性的外源蛋白已经获得高效生产，例如：;V%\*A
O-Xv
       (1)疫苗抗原类，破伤风毒素片段C、乙肝表面抗原、百日咳抗原P69、HIV-1外膜糖蛋白gP120、登革热病毒E蛋白等；v5U+S"q0josJzGeo
       (2)细胞因子类，肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子、内皮素抑制因子、巨噬细胞抑制因子、人和鼠的内因子等；Hr\+U+c!ly
       (3)蛋白酶类，人溶菌酶、α-葡萄糖苷酶、乙醛氧化酶、人胃促胰酶、人肝单胺氧化酶、人胎盘碱性磷酸酶等；
p}6Y.co*T0R        (4)蛋白类激素，胰岛素前体、人绒毛膜促性腺激素等；/G^ yap
       (5)抗体及单链抗体、受体等生物活性蛋白。tJ7w%xh2w6cR
       近年来 ，国内利用P.pastoris表达外源蛋白的种类和数量越来越多，如人血白蛋白、人内皮抑素、腐植酸酶和重组人白细胞介素等，而重组人肿瘤坏死因子、重组人干扰素、红细胞生成素和乙肝疫苗等已产业化和商品化。
5M6i!zc&J`5t        这些尝试为促进人们认识分子生物学领域的许多问题以及各真核细胞表达系统自身的背景奠定了实验基础。目前对分子水平的启动子调控还知之甚少，如何寻找新的替代启动子、更适合的选择标记和宿主菌，还有待进一步研究。随着真核表达系统的不断完善，其在分子生物理论和应用领域将发挥出越来越重要的作用。
cDO.q0D"uT
+?Yw%A J/X [b]发展J:cZ
i"C5CQ_
[/b]       越来越多的外源蛋白成功表达的例子证明。巴氏毕赤酵母表达系统是用来表达复杂真核蛋白的一类较为理想的表达系统，在基因工程产品产业化生产中具有很好的商业前景。
McV#O7C'Gi        目前已经建立了多种诱导表达系统，但它们都有其优点和不足，这就需要我们根据自己的要求选用适当的表达系统。一般来说，一个理想的可诱导表达系统需要符合下述几个方面的要求。"S a%fuX6]v$p4~
       ① 特异性：该系统不受其他内源因素的影响，仅能被外源的非毒性药物所活化。
]hcN)gko;}        ② 非干扰性：该系统成分不能对细胞通路有干扰。
FsG&@^'B        ③ 可诱导性：该系统在非活化状态下本底活性最低，而在活化状态下能快速产生高水平的基因表达。8ES&`A;kbm
       ④ 诱导剂的生物利用率：调节分子能快速渗透人各组织，能通过胎盘屏障及血脑屏障。
U;R.w?6|&k xKmd,z        ⑤ 可逆性：诱导剂能快速被各组织清除使该系统很快恢复非活化状态。
QN ^#b0sa{5N NK        ⑥ 剂量依赖性：该系统的反应与诱导剂的浓度成正比，以便进行定性定量分析。WRH&iX2w5~
       随着研究工作的进一步深人，真核细胞表达系统的日益完善，真核细胞将成为生产基因工程药物的主要生物反应器，高效真核表达载体和表达系统的研究将成为生物工程领域的热点。现阶段的重点应放在下述几个方面：
vPKz:vm)B        (1)高效表达载体的构建；
~P(d
MW4ro7T^&la-W7b        (2)高效稳定表达的细胞株筛选；"Z}GLi a~km
       (3)降低细胞培养成本、提高产量及实现培养设备的自动化；_-q:o3Gs-\ B6~
       (4)降低产物分离纯化成本、提高活性和回收率，等等。
mB2Dhu$q'|*v6S$f        总之，各种表达系统各有其优缺点，酵母和昆虫细胞表达系统蛋白表达水平高，生产成本低，但它们的加工修饰体系与哺乳动物细胞不完全相同；哺乳动物细胞产生的蛋白质更接近于天然蛋白质，但其表达量低、操作繁琐。各种表达系统由于翻译后的加工不完全相同，因而产生的重组蛋白的生物学活性和免疫原性有时会有差别。Van der GeId等利用不同的表达系统表达了蛋白激酶3(PR30)，并对它们的抗原性进行了比较，结果发现，在哺乳动物细胞中表达的PR3具有与抗PR3抗体结合的所有表位，在昆虫细胞中表达的PR3具有大部分表位，而在 甲醇酵母中表达的PR3只具有少数几个表位。因此，选择表达系统时，必须充分考虑各种因素，如所需表达的蛋白质性质、实验条件、生产成本、表达水平、安全性等，权衡利弊后再选择相应的表达系统。

xiaotao 发表于 07-10-28 17:58

谢谢

太感谢了，正为这个发愁。

redbreast 发表于 07-12-10 02:04

谢谢啦，顶顶:qq68:

klm_2000_0 发表于 08-1-12 14:27

楼主书看的真多

cowboy1106 发表于 08-1-17 18:46

谢谢版主啊 :qq60: :qq60:

nhdxzyb 发表于 08-1-26 07:32

非常感谢！！:handshake

neauliu 发表于 08-2-11 19:55

好

谢谢楼主，整理的非常好。

DNA_virus 发表于 08-2-13 09:13

谢谢版主

:lol 谢谢版主:quest:

notatall 发表于 08-3-1 19:25

非常感谢楼主的资料:excellent:

查看完整版本: 真核细胞表达系统