基因酷 基因库 Genecool's Archiver

设为首页  |   收藏基因酷  |   推荐给好友  |   站点导航
首页  •   基因酷商务平台  •   科研网址导航  •   科研工具条  •   资源保藏中心  •   质粒图谱信息  •   网游在线交易  •   生物QQ群组

microfox 发表于 07-8-12 19:18

酶联免疫吸附实验（ELISA）

[font=Times New Roman][size=1][size=11pt][align=center][font=宋体][size=11pt][b]ELISA[/b][/size][/font][size=11pt][/size][/align][font=宋体][/font]
/e3A:`8Tq`8t'` y B(T [font=宋体]主要内容：[size=11pt][/size],~9f/ZF'v/@I)Nn
[/font][size=11pt]1.[/size][font=Tahoma][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31595][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0][font=宋体]基本原理[/font][/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size] G4hZ1uh6f)R({
[font=Tahoma][size=11pt]2.[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31596][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0][font=宋体]技术之双抗体夹心法[/font][/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size]
f%b@*B*Me#z [font=Tahoma][size=11pt]3.[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31597][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0][font=宋体]技术之双抗原夹心法[/font][/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size]}1k%b)L;vJ/iM;W
[font=Tahoma][size=11pt]4.[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31598][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0][font=宋体]技术之间接法[/font][/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size]l'V e m e%J6rM
[font=Tahoma][size=11pt]5.[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31599][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0][font=宋体]技术之竞争法[/font][/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size]IA#f,@a a"[
[font=Tahoma][size=11pt]6.[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31600][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0][font=宋体]技术之捕获包被法[/font][/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size]
4e XY9_fi DJ [font=Tahoma][size=11pt]7.[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31601][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0][font=宋体]技术其他方法[/font][/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size]
s5?:J(LKG [font=Tahoma][size=11pt]8.[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31602][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0][font=宋体]常用试剂制备[/font][/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size]
N9lX6s:B2eu [font=Tahoma][size=11pt]9.[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31603][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0][font=宋体]分析软件[/font][/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size]
e7I e8@&`P [font=Tahoma][size=11pt]10.[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31604][color=#154ba0]ELISA HRP[/color][color=#154ba0][font=宋体]标记技术[/font][/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size] I` z)G? wMT
[font=Tahoma][size=11pt]11.[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31605][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0][font=宋体]的影响因素[/font][/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size]
K0w`YrY\ [font=Tahoma][size=11pt]12.[/size][/font][font=宋体][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31619][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0]标准操作及常见问题解析[/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size]/IDnT-N.g8H0Cq
[font=宋体][size=11pt]13.[url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31620][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0]存在的问题[/color][/url][/size][/font][size=11pt][/size]a-G$w)b%^"i.M1y
[font=宋体][size=11pt]14.[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs/viewthread.php?tid=8187&page=1#pid31621][color=#154ba0]ELISA[/color][color=#154ba0][font=宋体]的应用[/font][/color][/url][/size][/font]
#B\#b@$od [font=Tahoma][/font]
+k8|"E!k)a G%G#u [b]声明：[/b][size=11pt][/size]
:lNn P,l!w1e] [size=11pt]1[/size][font=宋体][size=11pt]、本篇涉及的资源主要源于网络及相关书籍，由酷友搜集、分析、整理、审改，供大家学习参考用，如有转载、传播请注明源于基因酷及本篇的工作人员；若本篇侵犯了您的版权或有任何不妥，请[/size][/font][size=11pt]Email [email=genecool@126.com][color=#154ba0]genecool@126.com[/color][/email][/size]告知。
_ ip3} D 2、由于我们的学识、经验有限，本篇难免会存在一些错误及缺陷，敬请不吝赐教：请到基因酷论坛（[size=11pt][url=http://www.genecool.com/bbs][color=#154ba0]www.genecool.com/bbs[/color][/url][/size][font=宋体][size=11pt]）本篇对应的专题跟贴指出或[/size][/font][size=11pt]Email [email=genecool@126.com][color=#154ba0]genecool@126.com[/color][/email][/size][font=宋体][size=11pt]。[/size][/font][size=11pt][/size]
UAus:sNH [size=11pt][/size]]`6Y!hT!|!h*f
[b]致谢：[/b]
} l2h6U&~;V&~ 整理者：[size=11pt]microfox          [/size][font=宋体][size=11pt]审改者：[/size][/font][size=11pt]wny[/size]
c3SuAI(D [size=11pt][/size] IfWU yus+x-C
[font=宋体][size=11pt]主要参考资料：《临床检验[/size][/font][size=11pt]ELISA[/size][font=宋体][size=11pt]指南》郑怀竞 韩松[/size][/font][size=11pt][/size]
YoF@Ym/~,pZ4|8u [size=11pt][/size]
s?iZYR v
[_.@ R-i [/size]
"Wc,Zx+i]%D#iv
"Fui-rkAfbM3j [align=center][/size][/font][/align];yI Mu3J/_

|Q[5qid;\ [[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 20:10 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-12 19:21

ELISA基本原理

[align=center][b]ELISA基本原理[/b][/align]
!XkO!i'Lgo,y-rc        ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。近二十几年来，免疫学分析方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后，使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继50年代的免疫荧光（IFA）和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后，1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法，建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术，是一种用酶标记抗原或抗体的方法。由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来。
'ul `+Ye        ELISA试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来，可敏感地检测体液中微量的特异性抗体或抗原。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。
^un pG~:hy6g [b]ELISA基本原理
v u h`2K$uR6a4wnT-EI [/b]       ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。K1x-VW ZC
       ELISA基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，基本原理有三条：p k t!nrpw
       （1） 抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；
2DG8~ ?9o        （2） 抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性； UoFA+o2[CTMl
       （3） 酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。:D Cfu9L
       由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
Mb0Lb1k,r-De&Y        在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

microfox 发表于 07-8-12 19:27

ELISA技术之双抗体夹心法

**** Hidden Message *****4j:Y!n^,pP
R(?4a%s*cIux
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 20:11 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-12 19:29

ELISA技术之双抗原夹心法

**** Hidden Message *****
P+]~jO vi h7Cc `zg0JHz+L*RD
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 20:11 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-12 19:31

ELISA技术之间接法

**** Hidden Message *****
'n1[3A Ic lE 7o%psXc3m%X*b
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 20:11 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-12 19:33

ELISA技术之竞争法

**** Hidden Message *****
m2U0dIKR Ac q r*D0TW
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 20:12 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-12 19:36

ELISA技术之捕获包被法

**** Hidden Message *****"cqDF y
F%J e&u;Y
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 20:12 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-12 19:43

ELISA技术其他方法

**** Hidden Message *****F WzJ`5ev V6^
G9^ Ccsmrz}
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 20:12 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-12 19:47

ELISA常用试剂制备

**** Hidden Message *****
.? S,V-X$E!zK} 7j N[!xh6],vXx!}u
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 20:13 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-12 19:53

ELISA分析软件

**** Hidden Message *****
0?X}J"?-@4b 0a"[I{5aonC
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 20:13 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-12 19:57

ELISA HRP标记技术

**** Hidden Message *****
8LE(uM#KT%W q dC!j*FJ^)xj
[[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 20:14 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-12 20:02

ELISA影响因素

**** Hidden Message *****
kH S$RU$V8@:i
L;~2VJn.L.]X$Kp [[i] 本帖最后由 nano 于 08-9-13 20:14 编辑 [/i]]

microfox 发表于 07-8-13 08:26

ELISA标准操作及常见问题解析

[align=center][color=#000000][b][font=宋体][size=11pt]ELISA标准操作及常见问题解析[/size][/font][/b][/color][color=#000000][b][size=11pt][font=Times New Roman][/align]
Xg#^P&B-hI2Moj*\t TbH-J;YCPwF B0A|
[size=11pt][font=Times New Roman][font=宋体][size=11pt]基本操作注意事项[/size][/font][b][size=11pt][/size][/b][/font][/size]
:I!jS0c8E 1[/font][/size][/b][b][font=宋体][size=11pt]．加样[/size][/font][/b][size=11pt][font=Times New Roman]:[/font][/size][/color]
6j[&jR3w5H j l2r [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]中一般有[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]3[/font][/size][font=宋体][size=11pt]次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]LEISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
l-S*W CW [color=#000000][b][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][/b][b][font=宋体][size=11pt]．保温[/size][/font][/b][b][size=11pt][/size][/b][/color],Cjmgp/{
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]抗原抗体完成反应的保温过程称为温育[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman](incubation)[/font][/size][font=宋体][size=11pt]。。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]:{3Zd#L"yi-oB
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]保温方式：[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]仪器附有特制的电热块，水浴。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]h'Yf N;@
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]若用保温箱：[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]板放在湿盒内，在盒底垫湿的纱布，最后将[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]板放在湿纱布上。反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]:II(o+T%_%Q
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]20[/font][font=Times New Roman]-25[/font][font=宋体]℃[/font][font=宋体]，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。[/font][/size][/color]c5T\NF5MD
[color=#000000][b][size=11pt][font=Times New Roman]3[/font][/size][/b][b][font=宋体][size=11pt]．洗涤[/size][/font][/b][b][size=11pt][/size][/b][/color]
:H4[;tD[/b|"u8vp [color=#000000][font=宋体][size=11pt]洗涤在[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]`Co|.R
[color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]ELSIA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]洗涤：[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
Du ] s$[-b1T&W [color=#000000][font=宋体][size=11pt]达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]操作中，洗涤是最主要的关键技术。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
En+` _K@d [color=#000000][font=宋体][size=11pt]洗涤的方式除某些[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作有流水冲洗式和浸泡式两种：[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
+|$l!fc:g [color=#000000][font=宋体][size=11pt]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）流水冲洗式[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]
(dF\ k(c"h [/font][/size][/color]5P:S,j,th kg;IG Wn
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]流水冲洗法最初用于小珠载体的洗涤，洗涤液为蒸馏水，自来水。洗涤效果更为彻底，且也简便、快速。已有实验表明，流水冲洗式同样适用于微量滴定板的洗涤。让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
2B"j:W^[ [color=#000000][font=宋体][size=11pt]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）浸泡式[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]
]9[W;Tw2Y#{u [/font][/size][/color](N] GJ;]
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]微量滴定板多采用。洗涤液为非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
;Fc.Kra!F6`:M'Q4} [color=#000000][b][size=11pt][font=Times New Roman]4[/font][/size][/b][b][font=宋体][size=11pt]．显色[/size][/font][/b][b][size=11pt][/size][/b][/color]"B(awF hjpWt'd'm
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]显色是酶催化无色的底物生成有色产物的温育反应。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
,m|.O*X n%m [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]TMB[/font][/size][font=宋体][size=11pt]受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]TMB[/font][/size][font=宋体][size=11pt]经[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]HRP[/font][/size][font=宋体][size=11pt]作用后，约[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]40[/font][/size][font=宋体][size=11pt]分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]小时后即可完全消退至无色。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
!sPta9| [color=#000000][b][size=11pt][font=Times New Roman]5[/font][/size][/b][b][font=宋体][size=11pt]．比色[/size][/font][/b][b][size=11pt][/size][/b][/color]&Z"sC _6RW ^
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪中。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
KYru6BnobB [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]    [/font][/size][font=宋体][size=11pt]以蒸馏水校零点，测读底物孔（未经任何反应仅加底物液的孔）和空白孔（以生理盐水或稀释液代替标本作全过程的孔），以记录本次试验的试剂状况。其后可用空白孔以蒸馏水校零点，以上各孔的吸光度需减去空白孔的吸光度，然后进行计算。[/size][/font][size=11pt][/size][/color] H*E-\3Mx|,`@
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]结果以光密度（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]oplical density[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]OD[/font][/size][font=宋体][size=11pt]），现按规定用吸光度（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]absorbence[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]A[/font][/size][font=宋体][size=11pt]），两者含义相同。通常的表示方法是，将吸收波长写于[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]A[/font][/size][font=宋体][size=11pt]字母的右下角，如[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]OPD[/font][/size][font=宋体][size=11pt]的吸收波长为[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]492nm[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，表示方法为[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]"A492nm"[/font][/size][font=宋体][size=11pt]或[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]"OD492nm"[/font][/size][font=宋体][size=11pt]。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
sp9rzN2]:eFl [size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size]
1WG,X6hu@4o#})M [color=#000000][b][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][/b][b][font=宋体][size=11pt]操作步骤[/size][/font][/b][b][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/b][/color]
5TGus*n [align=center][table=98%][tr][td=1,1,67][color=#000000][font=宋体][size=11pt]方法步骤[/size][/font][size=11pt][/size][/color]I:SEOus CA
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]间接法（测抗体）[/size][/font][size=11pt][/size][/color]L {?m#Vz#Cd
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]双抗体夹心法[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
xk4u-a`@ [color=#000000][font=宋体][size=11pt]（测抗原）[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
Rn/wH;s^,M [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]竞争法（测抗原）[/size][/font][size=11pt][/size][/color]%Q$g"kq])a!]*J
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]抑制性测定法[/size][/font][size=11pt][/size][/color]4p2]$R*HfN.~k
[/td][/tr][tr][td=1,1,67][size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman]1[/font][/color][/size]#Lt'q L }"s:Q3h
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]包被抗原：用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman](5~20μg/ml)[/font][/size][font=宋体][size=11pt]各[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.3ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]加于微反应板每个凹孔中[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman],[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=宋体]℃[/font][/size][font=宋体][size=11pt]过夜或[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]37[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]水浴[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]～[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]3[/font][/size][font=宋体][size=11pt]小时[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman],[/font][/size][font=宋体][size=11pt]贮存冰箱[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
4[j7zv#t%t [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1~10μg /ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]），每凹孔加[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.3ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]4[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]过夜，或[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]37[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]水浴[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]3[/font][/size][font=宋体][size=11pt]小时，贮存冰箱[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
9R7fZ1rvxKO [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]包被特异性抗体：[/size][/font][size=11pt][/size][/color]}}{&X F%bD})X1LK`
[size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman][/font][/color][/size]
]y {*\N C [color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
iZ{:b.| a4w W [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]包被抗原：[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
_!l?;n"w [size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman][/font][/color][/size]]d$a}YO dLR0G
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
*Q%nT]@ L-SU [/td][/tr][tr][td=1,1,67][size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman]2[/font][/color][/size]
F D'wJ z&G:p4l [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.05%[/font][/size][font=宋体][size=11pt]吐温[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]-20[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）洗[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]3[/font][/size][font=宋体][size=11pt]次，每次[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]5[/font][/size][font=宋体][size=11pt]分钟[/size][/font][size=11pt][/size][/color]g(Ben+Z5YLSg
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]g Ym-G1tx v \T
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]%@a9ZXZ
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
L*G.Ts{"v [/td][/tr][tr][td=1,1,67][size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman]3[/font][/color][/size]
v_qIS\H3WFS [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]加被检标本：每凹孔加入用含有[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.05%[/font][/size][font=宋体][size=11pt]吐温[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]-20[/font][/size][font=宋体][size=11pt]的稀释缓冲液稀释的被检血清各[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.2ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]37[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]，作用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]～[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]小时[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
V%v_!_xr'Wt HF.S,s [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]每凹孔加入[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.2ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]37[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]作用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]～[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]小时。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]RJ/@Eg&ewT g
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]分[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]组[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman],a[/font][/size][font=宋体][size=11pt]组加酶标记抗原和被检抗原混合液[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.2ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，另一组只加酶标记抗原液[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.2ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]37[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]作用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]～[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]小时。（混合液可作成不同稀释度）。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]_.z;V.tSZm
[/td][td=1,1,125][color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]a[/font][/size][font=宋体][size=11pt]组加参考抗体和被检抗原混合液[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.2ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，另一组加参考抗体与等量稀释剂[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.2ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]37[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]作用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]～[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]小时。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]i5{ l1Yg'tb,n Y
[/td][/tr][tr][td=1,1,67][size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman]4[/font][/color][/size]
vmK(K4hrh [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]洗涤：重复[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][/color]
+i4_V.r#A ?BG9S [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]#d,?w9{"y4~p
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]洗涤：同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color] `{8p_ H%j,~-dO8|
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]洗涤[/size][/font][size=11pt][/size][/color]-Jaa/Bh8?)Vl
[/td][/tr][tr][td=1,1,67][size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman]5[/font][/color][/size]ZrxKU
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]加入酶结合物：每凹孔加入稀释缓冲液稀释的酶结合物[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.2ml [/font][font=Times New Roman]37[/font][font=宋体]℃[/font][/size][font=宋体][size=11pt]作用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]～[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]小时[/size][/font][size=11pt][/size][/color]~(^kSjm
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]加入[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.2ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]37[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]作用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]～[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]小时或由预试实验确定作用时间。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
Y,BbE,Y5Bt&\0b [/td][td=1,1,125][size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size]
!fhD$`%[P [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]各加入[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.2ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]抗参考抗体的酶结合物[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]37[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]作用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]～[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]小时[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
d H^`d/w-[ [/td][/tr][tr][td=1,1,67][color=#000000][font=宋体][size=11pt]方法步骤[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
F)E.q0i^U(fF ^5\ [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]间接法（测抗体）[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
Jx0beU-z:}X [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]双抗体夹心法[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
COw-K,UoIJ)k [color=#000000][font=宋体][size=11pt]（测抗原）[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
'_&I8d:k v [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]竞争法（测抗原）[/size][/font][size=11pt][/size][/color] D^3s@t
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]抑制性测定法[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
)Z!D.Z%M$W,t5au _Q [/td][/tr][tr][td=1,1,67][size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman]6[/font][/color][/size]
3Q#G;t)oOl [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]洗涤：重复[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][/color]g S1l*sI#c;U:er
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
|k't7BfC7z;U!x [/td][td=1,1,125][size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size](D&iP,f%D3V
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]洗涤[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
-jn~\b,W7b oD'k [/td][/tr][tr][td=1,1,67][size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman]7[/font][/color][/size]
%B1d/s#JA:W Pu"sq R [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]加入[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.2ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]底物溶液于每个凹孔[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman],(O.P.D[/font][/size][font=宋体][size=11pt]或[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]O.T)[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，室温作用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]30[/font][/size][font=宋体][size=11pt]分钟（另作一空白对照，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.4ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]底物加[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.1ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]终止剂）。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
&T"T3G)C)W$uvOQ R8@-_ [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
"a"m_.Cg0V [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color] F:zpQ8p#n1X&Z~
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
;~&G3u4X#nL1F|m [/td][/tr][tr][td=1,1,67][size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman]8[/font][/color][/size]
)nl ~)a kt[F-XN [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]加终止剂：每凹孔加[/size][/font][font=Times New Roman][size=11pt]2M[/size][size=11pt] H2SO4[/size][/font][font=宋体][size=11pt]或[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2M[/font][/size][font=宋体][size=11pt]柠檬酸[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.05ml[/font][/size][font=宋体][size=11pt]。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
OT!BWq [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]p8FR-[P9]:Z
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
6I-hA's9o7t [/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
,Y4WQE5~3Xh8b [/td][/tr][tr][td=1,1,67][size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman]9[/font][/color][/size] J|-qR wm5W
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]观察记录结果：目测或用酶标比色计测定（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]O.P.D[/font][/size][font=宋体][size=11pt]用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]492nm[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]O.D[/font][/size][font=宋体][size=11pt]值。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]R{ v,MV+HnF
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]z \(bG.ng V
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]用酶标比色计测定[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]a[/font][/size][font=宋体][size=11pt]、[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]b[/font][/size][font=宋体][size=11pt]两组[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]O.D[/font][/size][font=宋体][size=11pt]值，并求出[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]a[/font][/size][font=宋体][size=11pt]、[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]b[/font][/size][font=宋体][size=11pt]、[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]O.D[/font][/size][font=宋体][size=11pt]值的差数[/size][/font][size=11pt][/size][/color]oP2Jo Ja
[/td][td=1,1,125][color=#000000][font=宋体][size=11pt]同左[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
C+uIJ8_"aA(^z [/td][/tr][/table][/align][size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size]
(PTv-PV [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]1 [/font][/size][font=宋体][size=11pt]问：请问对同样培养的相同浓度的细胞，用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]检测其上清液相同细胞因子的浓度，不同的报道差别为什么很大？[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
+rv)HWxt%D6m [color=#000000][font=宋体][size=11pt][b]参考解析[/b]：不同厂家的试剂盒当然有很大影响。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]非常敏感，即使是同一个试剂盒，用同一个厂家同一浓度的刺激因子，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]incubate [/font][/size][font=宋体][size=11pt]时间不同也会影响结果，这就是为什么每次都要设内部和外部对照的原因。这主要和其抗体标准品原料来源有关，建议购买[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]试剂盒时选择大公司提供的产品，这样结果比较可靠一点，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
b0F}m3wOE [size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size]Qh H|)[}+_
[color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]2 [/font][/size][font=宋体][size=11pt]问：[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。为什么[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]反应总是需要一定时间的温育？[/size][/font][size=11pt][/size][/color]?%p8Q1K&X"lV
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][b]参考解析[/b]：温育常采用的温度有[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]43[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]、[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]37[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]、室温和[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]4[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]（冰箱温度）等。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]37[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
9oZ*F O9_s [size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size]
O(m A ` p'j;i&ut [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]3 [/font][/size][font=宋体][size=11pt]问：检测疫苗免疫小鼠后的抗体情况。用了商品化的试剂盒。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]a;O3]m*TM
[color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]       1 [/font][/size][font=宋体][size=11pt]商品化的板子已经用病毒裂解液包被了。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
:_'s(X3w@M [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]       2 [/font][/size][font=宋体][size=11pt]洗[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]3[/font][/size][font=宋体][size=11pt]次后，将阳性和阴性血清（猪），样品血清（小鼠）[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]：[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]40[/font][/size][font=宋体][size=11pt]稀释加入，留[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]个空做空白对照，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]30[/font][/size][font=宋体][size=11pt]分钟[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]37[/font][/size][font=宋体][size=11pt]度[/size][/font][/color][size=11pt]R4{.QOfhm
[font=Times New Roman][color=#000000]       3 [/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]洗[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]3[/font][/size][font=宋体][size=11pt]次，在一个空白空中加入山羊抗小鼠二抗（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1:1000[/font][/size][font=宋体][size=11pt]），一个加入商品化已稀释抗猪二抗（不知稀释倍数）。在阳和阴中加入抗猪二抗，样品中加入抗鼠二抗。[/size][/font][/color][size=11pt]4l~I6v%?*W\
[font=Times New Roman][color=#000000]       4 [/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]洗[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]4[/font][/size][font=宋体][size=11pt]次。经加入底物[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]AB[/font][/size][font=宋体][size=11pt]侯显色[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]15[/font][/size][font=宋体][size=11pt]分钟。终止。测[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]630nm[/font][/size][/color]s z R_6uCu
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]结果加入猪二抗的空白空为[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.277[/font][/size][font=宋体][size=11pt]；阳性为[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.964[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，阴性为[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.503[/font][/size][/color]
\/Z,f R&t:A [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]假如鼠二抗的空白空为[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.951[/font][/size][font=宋体][size=11pt]：个样品都在[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1.000[/font][/size][font=宋体][size=11pt]作用[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
W$J+k%k5D [font=宋体][size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman]       [/font]请问为什么两个空白空的值差那么多？是不是鼠二抗与包被的病毒抗原结合，还是二抗的稀释倍数不够？或者其他原因？[/color][/size][/font][size=11pt]#U g\o"M6c ] p6NR/[
[font=Times New Roman][color=#000000][b]参考解析[/b][/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]：[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]首先抗猪二抗和抗鼠二抗本来就是不同的东西（且稀释度不同），在没有非特异性结合出现的情况下，应该是[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]OD[/font][/size][font=宋体][size=11pt]值相差无几，但是从现在的结果看，肯定是二抗有非特异性的结合（这一点从加入的样品鼠血清孔[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]与[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]鼠二抗空白孔差别不大也可以看出来），故造成两孔[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]OD[/font][/size][font=宋体][size=11pt]值差异。[/size][/font][/color][size=11pt]
{ l-^sde [font=Times New Roman][color=#000000]       2 [/color][/font][/size][font=宋体][size=11pt][color=#000000]当然这么高的本底也有可能是你的抗体浓度使用稀释度不当或者洗板不彻底（残余大量未结合的酶标抗体）造成的，请首先查明。[/color][/size][/font][size=11pt] ]4r8P,}W
[font=Times New Roman][color=#000000]       3 [/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]不知道你使用的是什么底物进行显色，好像常规[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]实验的底物是没有检测波长在[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]630nm[/font][/size][font=宋体][size=11pt]的。[/size][/font][/color][size=11pt]
{O^,z2xHuD"Gn [font=Times New Roman][color=#000000]       4 [/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]排除了[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2.3[/font][/size][font=宋体][size=11pt]两点的问题再考虑是否是二抗不纯并与包被的病毒裂解物结合的问题。[/size][/font][/color][size=11pt]
Kg5`K:K~q%L.n [font=Times New Roman][color=#000000]    [/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]你加入的商品化稀释的抗猪二抗，却不知道稀释度，这在[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]实验中是不可取的，酶标抗体的浓度过高必然引起显色本底很高。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]你可以取包被的板条不加样品直接加入梯度稀释的酶标记二抗，取[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]OD[/font][/size][font=宋体][size=11pt]值在[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]0.1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]以下时的稀释度再进行检测。若检测值很低则是抗体的敏感性问题，应当更换其它抗体。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
1~ f/ls({:G)Zq [size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size]#c0|~\+Dd
[color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]4[/font][/size][font=宋体][size=11pt]问：请教一下，用双夹心[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]法检测，用菌体免疫的小鼠和家兔，免疫后采集血清，可以直接包被血清吗，还是需要纯化后在包被？[/size][/font][/color][size=11pt]%D3ZN x[&BQ
[font=Times New Roman][color=#000000]       [/color][/font][/size][font=宋体][size=11pt][color=#000000]菌体与佐剂乳化时需要无菌操作吗？[/color][/size][/font][size=11pt](tF'Ff}0g
[font=Times New Roman][color=#000000]       [/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]分装血清用无菌操作吗？[/size][/font][size=11pt][/size][/color]&x2W4V*ze VI.K_
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][b]参考解析[/b]：血清不可以直接包被，主要是因为血清的[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]pH[/font][/size][font=宋体][size=11pt]和离子强度与通用的包被液不同，而且会造成一些非特异蛋白质的吸附，不利于特异性抗原或抗体的检测。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]l)\0D[zo~
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]纯化血清的方法很多，一般有盐析法和柱层析法，也可二者联合使用，视对纯度要求不同而异。一般盐析法（比如硫酸铵沉淀）纯化后就可获得主要的免疫球蛋白，而去除其他杂蛋白（如白蛋白等），如果需要进一步纯化的话，还可用凝胶层析法或离子交换层析法来进一步纯化获得[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]IgG[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，如果抗原足够纯的话，也可以用亲和层析法来做，但这些实验会导致抗体效价的下降和免疫球蛋白的损失，所以要充分衡量利弊再做决定。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
&Z$rQ(g;Kk rR*q [size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size]
0f&nVj'|Lem [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]5[/font][/size][font=宋体][size=11pt]问：要在[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]balb/c[/font][/size][font=宋体][size=11pt]小鼠上，免疫蛋白，做个预实验，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]elispot[/font][/size][font=宋体][size=11pt]检测[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]CTL[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]elisa[/font][/size][font=宋体][size=11pt]检测抗体，我想不加强免疫，在第一次免疫一周后，就做能出结果吗？[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
x4X]U~0@7C [color=#000000][font=宋体][size=11pt][b]参考解析[/b]：加强免疫只是增加血液中抗体滴度，只是量的增加，理论上不影响定性检测。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]elisa[/font][/size][font=宋体][size=11pt]的敏感性很高，第一次免疫后，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]CTL[/font][/size][font=宋体][size=11pt]和抗体都应该能够检测到，但实际操作对实验结果影响很大，具体检测效果如何，你应该试着做做。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]M3FXk:In
[size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size]0Uk DI WR VD
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]本底及假阳性产生的原因分析[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
E&p o1y)}j l+y)Hf [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]1. [/font][/size][font=宋体][size=11pt]基因工程抗原与合成肽抗原的区别[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
;Y&w"jcb+v6G*I [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font][/size][font=宋体][size=11pt]基因工程抗原是抗原基因在质粒载体中原核或真核表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌或酵母菌为表达系统。该类抗原与合成肽相比具有以下特点：[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]<BR>a.[/font][/size][font=宋体][size=11pt]分子量大。合成肽采用化学方法制备，由于工艺的局限，合成数量有限，只能达到数百个氨基酸；而利用基因工程制备的抗原，分子量更大。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
hMyXLe_:e [size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size]
m:\$m4w2{ [color=#000000][b][font=宋体][size=11pt]引起[/size][/font][/b][b][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][/b][b][font=宋体][size=11pt]测定错误结果的原因主要有：[/size][/font][/b][b][size=11pt][/size][/b][/color]p%@O;u*nr|/x
[color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]       1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]．标本因素；[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
2zM,OoZ[`| [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]       2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]．试剂因素；[/size][/font][size=11pt][/size][/color]9q@Wg0CL5k
[color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]       3[/font][/size][font=宋体][size=11pt]．操作因素。[/size][/font][size=11pt][/size][/color] | U6[EZy
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]本文就标本因素对[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]测定的影响做如下讨论。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color] nK&NW [6z E9i
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]血清是最常用的[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]性物质和外源性物质两种：[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]-piJ$Zm9[L+u
[color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]．内源性物质[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
u$u(V0p&gi3Z*~'XQ7_ [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]有人认为大约[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]40%[/font][/size][font=宋体][size=11pt]的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
{&ms~7v0M [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]Ig (s)[/font][/size][font=宋体][size=11pt]抗体、交叉反应物质和其它物质等。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
R;n5r.{JaF/A5K W| [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）类风湿因子[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
sK6n9l&bch3K C!UmD [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]人血清中[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]IgM[/font][/size][font=宋体][size=11pt]、[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]IgG[/font][/size][font=宋体][size=11pt]型类风湿因子（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]RF[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）可以与[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]系统中的捕获抗体及酶标记二抗的[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]FC[/font][/size][font=宋体][size=11pt]段直接结合，从而导致假阳性。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]解决该情况的办法是：①用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]F(ab)2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]替代完整的[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]IgG[/font][/size][font=宋体][size=11pt]；②标本用联有热变性（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]63[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]10 min[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]IgG[/font][/size][font=宋体][size=11pt]的固相吸附剂处理（将热变性[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]IgG[/font][/size][font=宋体][size=11pt]加入到标本稀释液中同样有效）；③检测抗原时，可以用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2-[/font][/size][font=宋体][size=11pt]巯基乙醇等加入到标本[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]稀释液中，使[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]RF[/font][/size][font=宋体][size=11pt]降解。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
%K2?&gSU&X6gY$a [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）补体[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
F1S n[t,v%O9V [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]       ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]系统中固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子发生变构，其[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]FC[/font][/size][font=宋体][size=11pt]段的补体[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]C1q[/font][/size][font=宋体][size=11pt]分子结合位点被暴露出来，使[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]C1q [/font][/size][font=宋体][size=11pt]可以将二者连接起来，从而造成假阳性。解决的办法是：①用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]EDTA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]稀释标本；②用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]53[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]10 min[/font][/size][font=宋体][size=11pt]或[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]56[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]30 min[/font][/size][font=宋体][size=11pt]加热血清使[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]C1q[/font][/size][font=宋体][size=11pt]灭活。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
IV-S/LS$M(](O [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]3[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）嗜异性抗体[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
@o2p+ik [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]Ig (s) [/font][/size][font=宋体][size=11pt]结合的天然嗜异性抗体，可将[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]系统中一抗和二抗连接起来，也能造成假阳性。解决的办法是：可在标本稀释液中加入过量的动[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]物[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]Ig (s) [/font][/size][font=宋体][size=11pt]，但加入量不足或亚类不同时无效。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color],n*hd `%Tp5GG g
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]4[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）嗜靶抗原的自身抗体[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]9g7Lj4g2EA
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，在[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]方法中均可干扰抗原抗体测定结果。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]为避免以上情况出现，解决的办法是：测定前需用理化方法将其解离后再测定。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
)WTYN6yx"b [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]5[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）医源性诱导的抗鼠[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]Ig (s) [/font][/size][font=宋体][size=11pt]抗体[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color];ly!O0M?$D
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]临床开展的用鼠源性[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]CD3[/font][/size][font=宋体][size=11pt]等单克隆抗体治疗，用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶向治疗等新技术，均有可能使这些病人体[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]内产生抗鼠抗体；另外，被鼠等啮齿类动物咬伤的病人体内也可以产生抗鼠[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]Ig (s) [/font][/size][font=宋体][size=11pt]抗体。这些病人[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]测定时均可产生假阳性。解决的办法是：测定抗原时，在标本中加入足量的正常鼠[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]Ig (s) [/font][/size][font=宋体][size=11pt]，从而克服由于上述原因造成的假阳性。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]V&H5p\7u{4CWU
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]6[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）交叉反应物质[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
0A,J G%~Dh:P:q0w O [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]类地高辛、类[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]AFP[/font][/size][font=宋体][size=11pt]样物质等，是与靶抗原有交叉反应的物质。在用多抗测定抗原时对测定结果影响不大，但在用单克隆抗体测定抗原时[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]，如果交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时，也会出现假阳性结果。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]!kr ?-WC
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]7[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）标本中其它成分的影响[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]$aJFPw]O6?
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及血液粘度过大等，均对[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]测定结果有干扰作用。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
|F/Mi7{h+T [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]．外源性物质[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
_&x,sYx [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]外源性物质常常是由于用于[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]不全和采血管中添加物等影响。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]n0@.Fazq0~k
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）标本溶血[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
"o"n ~-JW@D] [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]由于各种人为原因引起的标本溶血，均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为标记的[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]测定中，会导致非特异性显色，干扰测定结果。为克服上述干扰作用，标本采集时必须注意避免溶血。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]9h5|XN E%fT6T+C
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）标本受细菌污染[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
d7Rz8y{&C$U5`#? [color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color](x4S8y$V8wf {Lf
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]3[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）标本保存不当[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]1Z[n!n#QP
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]在冰箱中保存过久的标本，血清中[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]IgG[/font][/size][font=宋体][size=11pt]可聚合成多聚体、[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]AFP[/font][/size][font=宋体][size=11pt]可形成二聚体，在间接法[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]测定中会导致本底过深、甚至造成[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]假阳性；标本放置时间过长（如一天以上），有时抗原或抗体免疫活性减弱，亦可出现假阴性。为克服上述干扰，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]测定的血清[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]标本宜为新鲜采集；如不能立即测定，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]5[/font][/size][font=宋体][size=11pt]天内测定的血清标本可存放于[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]4[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][font=宋体][size=11pt]周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color] aX)Q:k"]\q2QUl
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]4[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）标本凝集不全[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]H1L+`mkZJ+B0}]-y9Tn
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下，正常血液采集后[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1/2~2h[/font][/size][font=宋体][size=11pt]开始凝固，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]18~24h[/font][/size][font=宋体][size=11pt]完全凝固。临床检验工作中，有时为了争取[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原，在[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]测定过程中可以形成[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；这类情况于次日复查时因血凝已完全，血清中不再有纤维蛋白原存在，故复查结果变为阴性[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]。为避免上述干扰作用，解决的办法最好是血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]管中加入适当的促凝剂。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]/? Nf1]k?x(M7q
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]5[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）标本管中添加物质的影响[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color].Pl.JZjCS
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]抗凝剂（如肝素，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]EDTA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）、酶抑制剂（如[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]NaN3[/font][/size][font=宋体][size=11pt]可抑制[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]系统中辣根过氧化物酶活性）及快速分离血清的分离胶等均对[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]E LISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]测定有一定干扰作用。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][font=宋体][size=11pt]综上所述，对临床检验[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]测定中出现的假阳性或假阴性结果，在考虑试剂因素和操作因素之外，更多的应从标本因素方面进行分析，并应采取相应措施排除干扰作用，从而为临床提供正确可靠的检测结果。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]]|pZY9i cho(P
[size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size]
j%s-l} Y M t ]\/^ [color=#000000][b][font=宋体][size=11pt]影响[/size][/font][/b][b][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][/b][b][font=宋体][size=11pt]试验效果常见问题原因分析及解决办法[/size][/font][/b][b][size=11pt][font=Times New Roman]  [/font][/size][/b][/color]
G;?(V0m~7D [color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]       ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
9k3?(F*BQDNx4Uc -ze7S@ [#j2{*[;c/@
[table][tr][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]操作步骤[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]Uo(?\IW Q
[/td][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]可能原因[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]xV w"R q2i0@ S0f%Q6H"m
[/td][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]解决办法[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]@$zz d!g4]?2j*C)I
[/td][/tr][tr][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]选择试剂[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
O"wNu8X%q+_\ [/td][td=2,1][color=#000000][font=宋体][size=11pt]选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]30-60[/font][/size][font=宋体][size=11pt]分钟。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
1X9C E eo X8XP [/td][/tr][tr][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]加[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]   [/font][/size][font=宋体][size=11pt]样[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
7B p~Y r&[4g [size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman]   [/font][/color][/size]
l%Y[,jRh [/td][td][color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]1.[/font][/size][font=宋体][size=11pt]血清或血浆标本分离不好即进行加样；[/size][/font][/color][size=11pt]5c)f9m F0DP m
[font=Times New Roman][color=#000000]2.[/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]([/font][/size][font=宋体][size=11pt]特别是室内温度较高时[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman])[/font][/size][font=宋体][size=11pt]；[/size][/font][/color][size=11pt]
s.oYN3DL)Xk!| [font=Times New Roman][color=#000000]3.[/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]G:P'o#``(T+m$~iZ(U
[size=11pt][color=#000000][font=Times New Roman]   [/font][/color][/size]
$H rh%t3lz \lb.q [/td][td][color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]1.[/font][/size][font=宋体][size=11pt]标本为血清：最好将血液先自然存放[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]1-2[/font][/size][font=宋体][size=11pt]小时后，再用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]3000rmp[/font][/size][font=宋体][size=11pt]离心[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]15[/font][/size][font=宋体][size=11pt]分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]5-10[/font][/size][font=宋体][size=11pt]次，放置一段时间后，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]3000rpm[/font][/size][font=宋体][size=11pt]离心[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]15[/font][/size][font=宋体][size=11pt]分钟；若在几天内检测，可放在[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]2[/font][font=Times New Roman]-8[/font][font=宋体]℃[/font][/size][font=宋体][size=11pt]冰箱中，若要贮存，则置于[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]-20[/font][/size][font=宋体][size=11pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=11pt]的低温冰箱内。[/size][/font][/color][size=11pt]$[5rp Ie H!V q
[font=Times New Roman][color=#000000]2.[/color][/font][/size][font=宋体][size=11pt][color=#000000]加样后及时放入孵箱。[/color][/size][/font][size=11pt](Z[U4v.[p$O
[font=Times New Roman][color=#000000]3.[/color][/font][/size][font=宋体][size=11pt][color=#000000]加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。[/color][/size][/font][size=11pt]
'[Drg7Q [font=Times New Roman][color=#000000]4.[/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]如果采用[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]AT[/font][/size][font=宋体][size=11pt]或其他全自动加样，最好选择[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]FAME[/font][/size][font=宋体][size=11pt]或其他后处理仪器加酶试剂。[/size][/font][/color][size=11pt]D8T-hgm5C]#C
[font=Times New Roman][color=#000000]5.[/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]标本较多时，请分批操作。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
3s9[.j6A:Z_ [/td][/tr][tr][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]孵[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]   [/font][/size][font=宋体][size=11pt]育[/size][/font][size=11pt][/size][/color]2O$v9B YGK
[/td][td][color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]1.[/font][/size][font=宋体][size=11pt]孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；[/size][/font][/color][size=11pt]
V%u ^1{)o7a` [font=Times New Roman][color=#000000]2.[/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]i;v~P"VoIB}
[/td][td][color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]1.[/font][/size][font=宋体][size=11pt]贴封片或加盖；[/size][/font][/color][size=11pt]3xd$a"@'_[ Ib
[font=Times New Roman][color=#000000]2.[/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]按说明步骤严格控制操作时间。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
#Ak)q^ | [/td][/tr][tr][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]洗[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]   [/font][/size][font=宋体][size=11pt]板[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
~T$^3L'v N&Z7Z [/td][td][color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]1.[/font][/size][font=宋体][size=11pt]采用手工洗板[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman],[/font][/size][font=宋体][size=11pt]孔与孔之间液体交叉。[/size][/font][/color][color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]
3Y7TRJ*J{1}h1_6QI 2.[/font][/size][font=宋体][size=11pt]采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。[/size][/font][/color][size=11pt] F$~9A5yX`mq TG4W
[font=Times New Roman][color=#000000]3.[/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]反应板过多造成洗板等待时间长。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]u-Fa*{@2xxaQ E
[/td][td][color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]1.[/font][/size][font=宋体][size=11pt]保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；[/size][/font][/color][size=11pt]%?XS1ZB
[font=Times New Roman][color=#000000]2.[/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]合理安排，或多用几台洗板机。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]R)t\` HcX0Zz
[/td][/tr][tr][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]显[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]   [/font][/size][font=宋体][size=11pt]色[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
*H~f [!yE [/td][td][color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]1. [/font][/size][font=宋体][size=11pt]显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；[/size][/font][/color][size=11pt]
@'zejWHk7?j [font=Times New Roman][color=#000000]2. [/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]加显色剂时溅出孔外造成液体回流。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
p!pC A(uy [/td][td][color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]1. [/font][/size][font=宋体][size=11pt]显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]TMB[/font][/size][font=宋体][size=11pt]显色剂不用；[/size][/font][/color][size=11pt],?*z3jq _s7w^%g
[font=Times New Roman][color=#000000]2. [/color][/font][/size][font=宋体][size=11pt][color=#000000]加样时保持显色剂不外流；[/color][/size][/font][size=11pt]){S/U6^!p|
[font=Times New Roman][color=#000000]3.A[/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]、[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]B[/font][/size][font=宋体][size=11pt]液应避免接触金属器械。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
};m6Bm:I)GUL [/td][/tr][tr][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]终[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]   [/font][/size][font=宋体][size=11pt]止[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]:y.n0S W,LT(x)u z
[/td][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
C0E:i`AM%P [/td][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]加终止液时应避免产生气泡。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]nW,F/F.Aw,f
[/td][/tr][tr][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]读[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]   [/font][/size][font=宋体][size=11pt]板[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
T+Z|qs9N [/td][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]读板时板底不清洁。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
Y2S9RI'} [/td][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]应保证酶标板清洁。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
+RuM+abd!sX7I [/td][/tr][tr][td][color=#000000][font=宋体][size=11pt]全过程[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]
PKNM6P|\G [/td][td=2,1][color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman]1.[/font][/size][font=宋体][size=11pt]整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸[/size][/font][/color][color=#000000][size=11pt][font=Times New Roman];
d bY Z3oe8e)S{f 2.[/font][/size][font=宋体][size=11pt]实现[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]检测标准自动化，有效提高检测质量。[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] [/font][/size][/color]2hVbuJ e7BXB
[/td][/tr][/table][size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size]1YT9zp ] yB
[color=#000000][font=宋体][size=11pt][font=Times New Roman]       [/font]在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ELISA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
` XR x(a$|!c [size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000][/color][/font][/size]
a `vwd,C4H/| H%a,U [align=left][b][font=Tahoma][size=11pt]ELISA[/size][/font][/b][b][font=宋体][size=11pt]常见问题及处理对策[/size][/font][/b][font=Tahoma][size=11pt] [/size][/font][/align]
kv:Z,m `]q+Fx_5k [table=98%][tr][td=1,1,3%][align=center][font=宋体][size=11pt]问题[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
"aw9v8WwS-b [/td][td=1,1,44%][align=center][font=宋体][size=11pt]可能原因[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align] b:RD['?&ruHR.A
[/td][td=1,1,53%][align=center][font=宋体][size=11pt]解决方法[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]o%yr4ePn NU"_
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]无颜色[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]:F#] v:A.I K2I$~3C
[/td][td][table=98%][tr][td][align=left][font=宋体][size=11pt]试剂孵育的时间没有按说明书操作。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]pE"C}I.l2L:sv-l
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]不同试剂盒或不同批号的试剂混用。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
"H2G9BM)M7zLI'T [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]漏加酶[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
1_%{?6}m0@Y7MZ D [/td][/tr][tr][td][align=center][font=Tahoma][size=11pt]HRP[/size][/font][font=宋体][size=11pt]酶污染了叠氮钠[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
:|[ s1Y h'c3y Bz [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]标准品有问题（若在标本孔中有信号）[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
hK3m8B*H.I [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]某一容器未洗净[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt],[/size][/font][font=宋体][size=11pt]残留灭活酶物质[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]{.zE4I+?"Ry
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]使用含血清的缓冲液配制[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]/[/size][/font][font=宋体][size=11pt]复溶抗体[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]&g.k NBZ4x
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]漏加显色剂[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]A[/size][/font][font=宋体][size=11pt]或[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]B[/size][/font][/align]3s|H:Hn)M C8JF
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]试剂配制[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]/[/size][/font][font=宋体][size=11pt]使用有误[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
lqr"{#` [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]缓冲液污染[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]x TN*s/jL+Co E6X
[/td][/tr][/table]{Xc0uk*?"n,j6[X
[align=center][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]3u6AOez
[/td][td][table=98%][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]确定生物素化抗体，连接的[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]HRP[/size][/font][font=宋体][size=11pt]试剂或链霉亲和素[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]-HRP[/size][/font][font=宋体][size=11pt]使用的时间是否适当。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
M^l8u+]o| gE'\ [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]重新检查试剂的标签，确准所有组分都属于正使用的试剂盒中的。不能混用不同试剂盒或不同批号的试剂[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
$[h.~}xw4t MG [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]检查操作流程，注意不要漏加[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]'cl$a~T/l,nc
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]使用新配制的试剂，禁含叠氮钠[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
4wk,u&@2x)b6R GK7G [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]按说明书检查标准品的制备使用[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]1[/size][/font][font=宋体][size=11pt]瓶新标准品[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt] [/size][/font][/align]
8Dve D+M [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]尽可能用试剂盒内容器[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt],[/size][/font][font=宋体][size=11pt]另觅一定要洁净、可靠[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
A$|Yy-Z}W3|6qha [ [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]重新确认所选用的试剂[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]zX7A(W f:Tp+})ZT
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]加显色剂后观察一下液面高度[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
}9NO3m@|(m#pP1Y"w$| [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]将实验重做；严格按说明书操作，每次配制和使用前看清标签。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]Gx h*bfVxvt
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]配制新新鲜的缓冲液[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
*}a*_t{KUS.E8J [/td][/tr][/table]9X\5Hb Y Z^n!Ps4M
[align=center][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
;@} G)pO3?+Wb&Ku [/td][/tr][/table][align=left][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]g'|;~U n*o
[table=98%][tr][td=1,1,3%][align=center][font=宋体][size=11pt]问题[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
#i*W,h(k"}pz/l [/td][td=1,1,56%][align=center][font=宋体][size=11pt]可能原因[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]pk?5XF5e}V
[/td][td=1,1,41%][align=center][font=宋体][size=11pt]解决方法[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
\h']u5uh [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]显色弱[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
Qo7t%Nj+qLA'\ [/td][td][table=98%][tr][td][align=left][font=宋体][size=11pt]超过有效期的产品可能会产生很弱的信号[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
XT3X `b [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]加入试剂的体积和时间有误[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
/o;M_2cf l6k [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]试剂、样品用前未能平衡[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
l:m1m'N(K9y [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]缩短孵育时间能使实验的信号变弱。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
+YZ8CGhB__ ] [y [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]在温度变化的环境内孵育酶标板。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]AYbD)in,E:^9@
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]使用了被污染的试剂[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]X"T{RD!?9Gd
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]标准品[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]/[/size][/font][font=宋体][size=11pt]标本制备方法不规范[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]8|.c/t PM TX(p
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]显色底物制备不规范[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
yFO,Ds'aN [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]检测时间不当[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
2hK7}[h ci [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]仪器设定不正确，滤光片不匹配。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]F:i6L ]"Kk*{
[/td][/tr][/table]
0F.m P"}UR [align=center][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
fIn$T]-]&Ij [/td][td][table=98%][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]检查产品的有效期[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt] [/size][/font][/align]
kCzEio3d&K [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]确定所使用的每一个试剂的体积正确的和加入的时间是适当的。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align] tR"n}7h1L8e
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]用前试剂、样品置室温平衡[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]10[/size][/font][font=宋体][size=11pt]分钟左右[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]y'Oh D;@x F:H d-dqx
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]检查孵育的时间。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
lkR&|u/v U/I [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]确定孵育的温度，应避免温度的变化。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]e6Hru s y?d\$S
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]检查试剂是否被污染。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]!M(y_E;Xb7JlHH
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]检查标准品[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]/[/size][/font][font=宋体][size=11pt]标本的制备，标准品应按说明书进行复溶和稀释。低温贮存的标本避免反复冻融，严禁使用溶血标本。样品用[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]NaN3[/size][/font][font=宋体][size=11pt]防腐[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt],[/size][/font][font=宋体][size=11pt]抑制了酶的反应[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align];R'D&?'mm9l.~L-d
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]检查底物的制备，如体积是否正确，混合是否恰当充分。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]^l"?R{Gd6s
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]是否在规定的时间内检测。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
_(Ew8\%{*Na [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]仪器是否设定正确，滤光片的使用等。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]8X(Zk4EJ#N@5s[
[/td][/tr][/table]
m/k[2sV4Px0q [align=center][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align])H!Ik'LdJA
[/td][/tr][/table][table=98%][tr][td=1,1,3%][align=center][font=宋体][size=11pt]高背景（本底）[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
9Q a3o@)_K4W)zz r"{ [/td][td=1,1,26%][table=98%][tr][td][align=left][font=宋体][size=11pt]洗涤操作不规范[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
&``Y L7zz [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]实验中孵育温度和时间不适当[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]6l@e4Lu G n`
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]酶加量过多[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]Xad7w3p/x)z6A
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]封闭不完全[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]RX'lwhg
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]标本或标准品中的干扰物质[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]/bj[u8Fs M{,s,].eR
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]显色剂受光照时间较长[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt],[/size][/font][font=宋体][size=11pt]或污染[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]G&^/UV:Q
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]整批样品放置时间过长[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt],[/size][/font][font=宋体][size=11pt]样品污染[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
\&kUg2R [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]缓冲液污染[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]Wz5G CF|)S(A
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]吸头重复使用[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt],[/size][/font][font=宋体][size=11pt]未洗净或消毒不完全而用于加酶或显色剂[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]dX4G]M#|v(Wx
[/td][/tr][/table]7e @!B,`6zN(|'P
[align=center][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align])iXhTR)z
[/td][td=1,1,71%][table=98%][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]洗板不充分，使用手工洗板常出现。最好使用洗板机，或使用洗瓶洗涤。每孔应完全充满洗涤缓冲液，倾出时应迅速。若使用洗板机，应校准并设定足够充满每孔的体积量。板的内侧不应接触设备。检查每孔是否有残留的洗液或每孔加样量的体积是否准确。在两次洗板之间加[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]30[/size][/font][font=宋体][size=11pt]秒的浸泡。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt] [/size][/font][/align]
@D!U$s.y-YTi(O [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]确定每一实验步骤的孵育温度和时间是否适当[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
p*K&edmc h.glP [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]加酶前验看移液器调节量是否准确。检查稀释度，若必要进行效价测定。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt] [/size][/font][/align]'e,fsno"C
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]检查封闭液的计算量；提高封闭时间。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
-|4Q_+ij)_'e [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]做适当的对照[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]K8T)Xr%J
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]显色剂[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]A[/size][/font][font=宋体][size=11pt]和[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]B[/size][/font][font=宋体][size=11pt]应于使用前[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]10[/size][/font][font=宋体][size=11pt]分钟从冰箱取出[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]k!kgheh y$g;V
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]样品应保持新鲜[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt],[/size][/font][font=宋体][size=11pt]或低温保存[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt],[/size][/font][font=宋体][size=11pt]防止污染[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
_-Z)ts3Xs.e [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]制备新鲜的缓冲液[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]`|k)[U$J3\sl
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]吸头尽可能一次性使用[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]8d({b9n yQX6N9O
[/td][/tr][/table]
{H2r?(]4tV"D`] Y [align=center][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
*saO+XcI DX T [/td][/tr][/table][align=left][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
w0iS.dI+hc [table=98%][tr][td=1,1,3%][align=center][font=宋体][size=11pt]太多的信号：全部的板子变成规则的蓝色[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt] [/size][/font][/align]
McV1A2xY6F [/td][td=1,1,44%][table=98%][tr][td][align=left][font=宋体][size=11pt]试剂孵育的时间没有按说明书操作。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]*a\Dy%G(`.b?
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]不同试剂盒或不同批号的试剂混用。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
N,})lo!x4m8m v m [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]漏加酶[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
jm]5Hx]C [/td][/tr][tr][td][align=center][font=Tahoma][size=11pt]HRP[/size][/font][font=宋体][size=11pt]酶污染了叠氮钠[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]2RJ;Y,RE
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]标准品有问题（若在标本孔中有信号）[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]R B A `@xt
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]某一容器未洗净[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt],[/size][/font][font=宋体][size=11pt]残留灭活酶物质[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]-Cv5h0l/OM
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]使用含血清的缓冲液配制[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]/[/size][/font][font=宋体][size=11pt]复溶抗体[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]p!Q q7W%l#a3Mf
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]漏加显色剂[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]A[/size][/font][font=宋体][size=11pt]或[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]B[/size][/font][/align]0h.U([r&U8l F^qB
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]试剂配制[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]/[/size][/font][font=宋体][size=11pt]使用有误[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]o%X*f d y:j K
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]缓冲液污染[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
.g^d![ C@ l [/td][/tr][/table] UrG2X5t5frt7^kc
[align=center][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]S S1dr)DFlI$T
[/td][td=1,1,53%][table=98%][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]确定生物素化抗体，连接的[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]HRP[/size][/font][font=宋体][size=11pt]试剂或链霉亲和素[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]-HRP[/size][/font][font=宋体][size=11pt]使用的时间是否适当。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]6g4u _$z4vy
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]重新检查试剂的标签，确准所有组分都属于正使用的试剂盒中的。不能混用不同试剂盒或不同批号的试剂[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
)S}M-Y%Z cs@)K;V [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]检查操作流程，注意不要漏加[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]`$O%b2[$P@s9g
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]使用新配制的试剂，禁含叠氮钠[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]f#?7CBF]3A#R,~
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]按说明书检查标准品的制备使用[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]1[/size][/font][font=宋体][size=11pt]瓶新标准品[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt] [/size][/font][/align]
X/t aJMa+t*O [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]尽可能用试剂盒内容器[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt],[/size][/font][font=宋体][size=11pt]另觅一定要洁净、可靠[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]b*[rnx&nH*M-kq1c
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]重新确认所选用的试剂[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align] P]A(K@ZX
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]加显色剂后观察一下液面高度[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]w1uWs"`h6g2bC
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]将实验重做；严格按说明书操作，每次配制和使用前看清标签。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
v2c Dj2k/W!I)p} [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]配制新新鲜的缓冲液[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]4oQ)\6e.f
[/td][/tr][/table]C:f,LRo
[align=center][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
9dsr;YaLbuEQ [/td][/tr][/table][align=left][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
bnl.Hcl [table=98%][tr][td=1,1,13%][align=center][font=宋体][size=11pt]问题[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align].f*s*j*PcY(@[ \
[/td][td=1,1,44%][align=center][font=宋体][size=11pt]可能原因[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]5p"hr&rKn&G
[/td][td=1,1,43%][align=center][font=宋体][size=11pt]解决方法[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
:g"E~1w!a#H-^ [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]高[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]CV[/size][/font][font=宋体][size=11pt]值（[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]CV[/size][/font][font=宋体][size=11pt]：[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]coefficient of variation[/size][/font][font=宋体][size=11pt]），花板[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align] \+n e1ofe)p
[/td][td][table=98%][tr][td][align=left][font=宋体][size=11pt]操作不慎或洗涤不充分[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
7l x7x3X*U+v!G [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]出现干板，没有使用封板膜、封板膜重复使用[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]bV \C!^x
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]由于操作失误或板子质量差（结合不均匀）造成包板不均匀。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
2U0hr.C"L4G%kd [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]移液器不准确，吸头重复使用。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
k[,f2a+V*nQ [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]样品离心处理不全[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt],[/size][/font][font=宋体][size=11pt]反应孔内发生凝血或残留细胞成分[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
:k%ShlPI+wAP [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]缓冲液污染[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
w$X*H-RWT$Hv [/td][/tr][/table][VCLv'rj2u r
[align=center][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
?"h3|^oW? [/td][td][table=98%][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]按说明书洗板、加样、显色。洗板尤为重要，如上所述[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]6{)IK2|9]
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]确定每两步骤间，酶标板应保持湿润。使用封板膜封口，注意每步使用新鲜的封板膜。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt] [/size][/font][/align]Fr2Y5bh"S
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]稀释用的[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]PBS[/size][/font][font=宋体][size=11pt]中不要加其它蛋白检查包被和封闭液体积、时间和试剂加入的方法。检查所使用的酶标板，使用[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt]ELISA[/size][/font][font=宋体][size=11pt]板子（不要使用组织培养板）[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt] [/size][/font][/align];v}]Ue(v
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]检查并校准移液器。每次取样必须换吸头。回顾标本的加入步骤，确保每次加样的准确性，保证吸取的液体按所设定的体积吸入和排出，连续加样时注意检查吸头，确保所加液体的体积。[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
$y2b Kb:Y1nBGyY [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]标本充分离心[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt], 3000rpm 6[/size][/font][font=宋体][size=11pt]分以上，严禁使用凝血（溶血）的标本[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
{pbDJ7[qh|W [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]制备新鲜的缓冲液[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
0k,zWY0J [/td][/tr][/table]}M%z&GjPB2mv
[align=center][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align] d:f.hw0m1T
[/td][/tr][/table][align=left][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align])v~ NI1|*qP"~
[table=98%][tr][td=1,1,13%][align=center][font=宋体][size=11pt]问题[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]:j*n5D}dH,I1J
[/td][td=1,1,67%][align=center][font=宋体][size=11pt]可能原因[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
#}zCQ'^nY3w1y [/td][td=1,1,20%][align=center][font=宋体][size=11pt]解决方法[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]B h bt'^0H.H&o
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]标准曲线可得到，但两点之间区别很差（低或平的曲线）[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
8QR8{ lW0z/p Id [/td][td][table=98%][tr][td][align=left][font=宋体][size=11pt]酶结合物不足[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
~0c\@N*j0h [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]捕获抗体没有很好结合到板上[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
Kw*d0e9c#B2i:lkd [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]检测抗体不足[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align].d-Ai9F!F
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]板子显色不足[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
o? ff%j_9l2X#a [/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]操作不慎[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]Lt;?5V['@&~0f~
[/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体][size=11pt]标准曲线稀释度计算有误[/size][/font][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]
n`8q9BL [/td][/tr][/table]
!jNs J%s x4`5l0V [align=center][font=Tahoma][size=11pt][/size][/font][/align]