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flashhyh 发表于 07-8-8 18:47

发贴格式测试

[align=center][align=center][color=#000000][b][font=宋体][size=22pt]免疫组织化学基本原理[/size][/font][/b][b][size=22pt][/size][/b][/color][/align][/align][color=#000000][b][size=11pt][font=Times New Roman]1[/font][/size][/b][b][font=宋体][size=11pt]．简介[/size][/font][/b][b][size=11pt][/size][/b][/color]
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman] ([/font][/size][font=宋体][size=11pt]荧光素、酶、金属离子、同位素[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]) [/font][/size][font=宋体][size=11pt]显色来确定组织细胞内抗原[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]([/font][/size][font=宋体][size=11pt]多肽和蛋白质[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman])[/font][/size][font=宋体][size=11pt]，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法，免疫铁蛋白法。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]免疫金法及放射免疫自影法等。用于病理诊断的主要有免疫荧光法和免疫酶法。免疫荧光法是现代生物学和医学中广泛应用的方法之一，包括荧光抗体和荧光抗原技术，具有抗原抗体反应的特异性，染色技术的快速性，在细胞或组织上定位的准确性，以及荧光效应的灵敏性等优势。但是，由于免疫荧光法必须具有荧光显微镜，荧光强度随时间的延长而逐渐消退，结果不易长期保存等缺点，在普及应用上受到一定限制，而逐渐被免疫酶法所取代。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]免疫组化技术的优点[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
[size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000]1．
[/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]特异性强[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]keratin[/font][/size][font=宋体][size=11pt]）显示上皮成分，[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]LCA[/font][/size][font=宋体][size=11pt]显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
[size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000]2．
[/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]敏感性高　[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
[color=#000000][font=宋体][size=11pt]在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]ABC[/font][/size][font=宋体][size=11pt]法或[/size][/font][size=11pt][font=Times New Roman]SP[/font][/size][font=宋体][size=11pt]法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
[size=11pt][font=Times New Roman][color=#000000]3．
[/color][/font][/size][color=#000000][font=宋体][size=11pt]定位准确、[/size][/font][size=11pt][/size][/color]
[font=宋体][size=11pt][color=#000000]形态与功能相结合　该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学研究的深入是十分有意义的。[/color][/size][/font][size=11pt][/size]

flashhyh 发表于 07-8-8 18:48

[align=center][align=center][b][font=宋体][size=22pt]免疫组织化学基本原理[/size][/font][/b][b][size=22pt][/size][/b][/align][/align][b][size=11pt]1[/size][/b][b][font=宋体][size=11pt]．简介[/size][/font][/b][b][size=11pt][/size][/b]
[font=宋体][size=11pt]免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂[/size][/font][size=11pt] ([/size][font=宋体][size=11pt]荧光素、酶、金属离子、同位素[/size][/font][size=11pt]) [/size][font=宋体][size=11pt]显色来确定组织细胞内抗原[/size][/font][size=11pt]([/size][font=宋体][size=11pt]多肽和蛋白质[/size][/font][size=11pt])[/size][font=宋体][size=11pt]，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。[/size][/font][size=11pt][/size]
[font=宋体][size=11pt]免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法，免疫铁蛋白法。[/size][/font][size=11pt][/size]
[font=宋体][size=11pt]免疫金法及放射免疫自影法等。用于病理诊断的主要有免疫荧光法和免疫酶法。免疫荧光法是现代生物学和医学中广泛应用的方法之一，包括荧光抗体和荧光抗原技术，具有抗原抗体反应的特异性，染色技术的快速性，在细胞或组织上定位的准确性，以及荧光效应的灵敏性等优势。但是，由于免疫荧光法必须具有荧光显微镜，荧光强度随时间的延长而逐渐消退，结果不易长期保存等缺点，在普及应用上受到一定限制，而逐渐被免疫酶法所取代。[/size][/font][size=11pt][/size]
[font=宋体][size=11pt]免疫组化技术的优点[/size][/font][size=11pt][/size]
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[font=宋体][size=11pt]免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（[/size][/font][size=11pt]keratin[/size][font=宋体][size=11pt]）显示上皮成分，[/size][/font][size=11pt]LCA[/size][font=宋体][size=11pt]显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。[/size][/font][size=11pt][/size]
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[font=宋体][size=11pt]在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于[/size][/font][size=11pt]ABC[/size][font=宋体][size=11pt]法或[/size][/font][size=11pt]SP[/size][font=宋体][size=11pt]法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。[/size][/font][size=11pt][/size]
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[font=宋体][size=11pt]形态与功能相结合　该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学研究的深入是十分有意义的。[/size][/font]

flashhyh 发表于 07-8-8 18:49

[align=center][align=center][b][font=宋体][size=22pt]免疫组织化学基本原理[/size][/font][/b][b][size=22pt][/size][/b][/align][/align][b][size=11pt]1[/size][/b][b][font=宋体][size=11pt]．简介[/size][/font][/b][b][size=11pt][/size][/b]
[font=宋体][size=11pt]免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂[/size][/font][size=11pt] ([/size][font=宋体][size=11pt]荧光素、酶、金属离子、同位素[/size][/font][size=11pt]) [/size][font=宋体][size=11pt]显色来确定组织细胞内抗原[/size][/font][size=11pt]([/size][font=宋体][size=11pt]多肽和蛋白质[/size][/font][size=11pt])[/size][font=宋体][size=11pt]，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。[/size][/font][size=11pt][/size]
[font=宋体][size=11pt]免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法，免疫铁蛋白法。[/size][/font][size=11pt][/size]
[font=宋体][size=11pt]免疫金法及放射免疫自影法等。用于病理诊断的主要有免疫荧光法和免疫酶法。免疫荧光法是现代生物学和医学中广泛应用的方法之一，包括荧光抗体和荧光抗原技术，具有抗原抗体反应的特异性，染色技术的快速性，在细胞或组织上定位的准确性，以及荧光效应的灵敏性等优势。但是，由于免疫荧光法必须具有荧光显微镜，荧光强度随时间的延长而逐渐消退，结果不易长期保存等缺点，在普及应用上受到一定限制，而逐渐被免疫酶法所取代。[/size][/font][size=11pt][/size]
[font=宋体][size=11pt]免疫组化技术的优点[/size][/font][size=11pt][/size]
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[font=宋体][size=11pt]免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（[/size][/font][size=11pt]keratin[/size][font=宋体][size=11pt]）显示上皮成分，[/size][/font][size=11pt]LCA[/size][font=宋体][size=11pt]显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。[/size][/font][size=11pt][/size]
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[font=宋体][size=11pt]在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于[/size][/font][size=11pt]ABC[/size][font=宋体][size=11pt]法或[/size][/font][size=11pt]SP[/size][font=宋体][size=11pt]法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。[/size][/font][size=11pt][/size]
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[font=宋体][size=11pt]形态与功能相结合　该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学研究的深入是十分有意义的。[/size][/font]

flashhyh 发表于 07-8-8 18:50

免疫组织化学基本原理
1．简介
　　免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。
　　免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法，免疫铁蛋白法。
免疫金法及放射免疫自影法等。用于病理诊断的主要有免疫荧光法和免疫酶法。免疫荧光法是现代生物学和医学中广泛应用的方法之一，包括荧光抗体和荧光抗原技术，具有抗原抗体反应的特异性，染色技术的快速性，在细胞或组织上定位的准确性，以及荧光效应的灵敏性等优势。但是，由于免疫荧光法必须具有荧光显微镜，荧光强度随时间的延长而逐渐消退，结果不易长期保存等缺点，在普及应用上受到一定限制，而逐渐被免疫酶法所取代。
　　免疫组化技术的优点
1． 特异性强
　　免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。
2． 敏感性高　
　　在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。
3． 定位准确、
　　形态与功能相结合　该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学研究的深入是十分有意义的。

flashhyh 发表于 07-8-8 18:54

[align=center]免疫组织化学基本原理[/align]
[b]1．简介[/b]
　　免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。
　　免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法，免疫铁蛋白法。
免疫金法及放射免疫自影法等。用于病理诊断的主要有免疫荧光法和免疫酶法。免疫荧光法是现代生物学和医学中广泛应用的方法之一，包括荧光抗体和荧光抗原技术，具有抗原抗体反应的特异性，染色技术的快速性，在细胞或组织上定位的准确性，以及荧光效应的灵敏性等优势。但是，由于免疫荧光法必须具有荧光显微镜，荧光强度随时间的延长而逐渐消退，结果不易长期保存等缺点，在普及应用上受到一定限制，而逐渐被免疫酶法所取代。
[b]　　免疫组化技术的优点[/b]
1． 特异性强
　　免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。
2． 敏感性高　
　　在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。
3． 定位准确、
　　形态与功能相结合　该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学研究的深入是十分有意义的。

flashhyh 发表于 07-8-8 18:56

免疫组织化学基本原理
1．简介
　　免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。
　　免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法，免疫铁蛋白法。
免疫金法及放射免疫自影法等。用于病理诊断的主要有免疫荧光法和免疫酶法。免疫荧光法是现代生物学和医学中广泛应用的方法之一，包括荧光抗体和荧光抗原技术，具有抗原抗体反应的特异性，染色技术的快速性，在细胞或组织上定位的准确性，以及荧光效应的灵敏性等优势。但是，由于免疫荧光法必须具有荧光显微镜，荧光强度随时间的延长而逐渐消退，结果不易长期保存等缺点，在普及应用上受到一定限制，而逐渐被免疫酶法所取代。
　　免疫组化技术的优点
1． 特异性强
　　免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。
2． 敏感性高　
　　在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。
[align=center][attach]1685[/attach][/align]
3． 定位准确、
　　形态与功能相结合　该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学研究的深入是十分有意义的。

flashhyh 发表于 07-8-9 12:08

[align=center][align=center][b][font=宋体][size=10pt]质粒小量提取之煮沸法[/size][/font][/b][b][font=Tahoma][size=10pt]
5t:i7\%w*M7?,~5C??[url]www.genecool.com[/url][/size][/font][/b][font=Tahoma][size=10pt][/size][/font][/align][/align][align=left][align=left][b][font=宋体][size=10pt]试验原理：[/size][/font][/b][font=Tahoma][size=10pt]
5L#[9m1s+\!P+Z"J:X????[/size][/font][size=10pt]ɺ[/size][font=Tahoma][size=10pt]ί[/size][/font][size=10pt]ȋ[/size][font=Tahoma][size=10pt]?Ľ??[/size][/font][size=10pt]ƽ[/size][font=Tahoma][size=10pt]̨[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]煮沸法是根据[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]Holmex[/size][/font][font=宋体][size=10pt]和[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]Quigley(1985)[/size][/font][font=宋体][size=10pt]的方法改进而成的。在基因工程中，[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]分子的切割是由限制性内切酶来完成的。限制性内切酶能识别特定的[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]序列，在一定的条件下切断双链[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]。限制性内切酶的作用效率是受多方面因素影响的，如反应温度，缓冲体系，离子种类与浓度，[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]的纯度和甲基化程度等。对[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]进行酶切时，首先要选择适合的缓冲液。对于单酶切，应选用该酶的最适缓冲液；对于双酶切或三酶切，应选用一种能使所有酶都充分作用的缓冲液。[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]的纯度对于酶切的效果的影响也很大，因为蛋白质。酚。氯仿。[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] SDS [/size][/font][font=宋体][size=10pt]等杂质都会抑制限制性内切酶的活性。[/size][/font]
[font=Tahoma][size=1pt]www.genecool.com!}.U:`3P)l(\*i;t2~[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]琼脂糖凝胶电泳是分离，鉴定和纯化[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]片段的常规方法。利用低浓度的荧光嵌入染料[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] - [/size][/font][font=宋体][size=10pt]溴化乙锭进行染色，可确定[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]在凝胶中的位置。如有必要，还可以从凝胶中[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]回收[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]条带，用于各种克隆操作。琼脂糖凝胶的分辨能力要比聚丙烯酰胺凝胶低，但其分离范围较广。用各种浓度的琼脂糖凝胶可以分离长度为[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] 200bp [/size][/font][font=宋体][size=10pt]至近[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] 50kbp [/size][/font][font=宋体][size=10pt]的[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]。长度[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] 100kb [/size][/font][font=宋体][size=10pt]或更大的[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]，可以通过电场方向呈周期性变化的脉冲电场凝胶电泳进行分离。[/size][/font]
[font=Tahoma][size=1pt]www.genecool.com&@$~%~5Z9j*l4m6M[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]在基因工程的常规操作中，琼脂糖凝胶电泳应用最为广泛。它通常采用水平电泳装置，在强度和方向恒定的电场下进行电泳。[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]分子在凝胶缓冲液（一般为碱性）中带负电荷，在电场中由负极向正极迁移。[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] DNA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]分子迁移的速率受分子大小，构象。电场强度和方向，碱基组成，温度和嵌入染料等因素的影响。[/size][/font]
[font=Tahoma][size=1pt]??[url]www.genecool.com[/url]!t0P)n,{#e,z/L-\[/size][/font]
[b][font=宋体][size=10pt]实验准备：[/size][/font][/b]
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1[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] 70% [/size][/font][font=宋体][size=10pt]乙醇（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] -20 [/size][/font][font=宋体][size=10pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=10pt]）及无水乙醇（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] -20 [/size][/font][font=宋体][size=10pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=10pt]）[/size][/font]
[font=Tahoma][size=1pt]3}.u.O9z*Q+{'U3b&E+`3j[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
2[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] STET [/size][/font][font=宋体][size=10pt]缓冲液（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] pH8.0 [/size][/font][font=宋体][size=10pt]）（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] 8% [/size][/font][font=宋体][size=10pt]蔗糖，[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] 0.5%Triton, 50mmol/L EDTA,,10mmol/L Tris [/size][/font][font=宋体][size=10pt]）[/size][/font]
[font=Tahoma][size=1pt]â?[/size][/font][size=1pt]ѻ[/size][font=Tahoma][size=1pt]?[/size][/font][size=1pt]ϭ[/size][font=Tahoma][size=1pt]www.genecool.com2k-J8q#G.{'g%e4C/\*N,p[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
3[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] 1.2M [/size][/font][font=宋体][size=10pt]氯化钠[/size][/font]
[font=Tahoma][size=1pt]www.genecool.com0z,o-l:|#o'{:{[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
4[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] TE [/size][/font][font=宋体][size=10pt]缓冲液（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] 10mmol/L Tris-HCl, 1mmol/L EDTA [/size][/font][font=宋体][size=10pt]）[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
/T,J6L-F:s#S8L????[/size][/font][size=10pt]ɺ[/size][font=Tahoma][size=10pt]ί[/size][/font][size=10pt]ȋ[/size][font=Tahoma][size=10pt]?Ľ??[/size][/font][size=10pt]ƽ[/size][font=Tahoma][size=10pt]̨[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]5[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] STET:0.1mol/L NaCl[/size][/font][font=宋体][size=10pt]，[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]10mmol/L TrisCl[/size][/font][font=宋体][size=10pt]（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]pH8.0[/size][/font][font=宋体][size=10pt]），[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]1mmol/L EDTA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]pH8.0[/size][/font][font=宋体][size=10pt]），[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]5[/size][/font][font=宋体][size=10pt]％[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]Triton X[/size][/font][font=宋体][size=10pt]－[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]10[/size][/font][font=宋体][size=10pt]（其他同碱裂解法）[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]????[/size][/font][size=1pt]ɺ[/size][font=Tahoma][size=1pt]ί[/size][/font][size=1pt]ȋ[/size][font=Tahoma][size=1pt]?Ľ??[/size][/font][size=1pt]ƽ[/size][font=Tahoma][size=1pt]̨%A'G.[$[+h[/size][/font]
[b][font=宋体][size=10pt]试验步骤：[/size][/font][/b][b][font=Tahoma][size=1pt]????[/size][/font][/b][b][size=1pt]ɺ[/size][/b][b][font=Tahoma][size=1pt]ί[/size][/font][/b][b][size=1pt]ȋ[/size][/b][b][font=Tahoma][size=1pt]?Ľ??[/size][/font][/b][b][size=1pt]ƽ[/size][/b][b][font=Tahoma][size=1pt]̨#g3I4c,R7X8]8y4F3s:X[/size][/font][/b][b]
[/b][font=Tahoma][size=10pt]1[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]无菌操作台上取[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]1.5ml[/size][/font][font=宋体][size=10pt]培养菌体置于离心管（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]Eppendorf[/size][/font][font=宋体][size=10pt]管）中，微量离心机上[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]10000rpm[/size][/font][font=宋体][size=10pt]离心[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]1min[/size][/font][font=宋体][size=10pt]，或者以[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]????[/size][/font][size=1pt]ɺ[/size][font=Tahoma][size=1pt]ί[/size][/font][size=1pt]ȋ[/size][font=Tahoma][size=1pt]?Ľ??[/size][/font][size=1pt]ƽ[/size][font=Tahoma][size=1pt]̨)a)}6]!]8j2?*A0L7Q6r)T ^[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
      4000rpm[/size][/font][font=宋体][size=10pt]离心[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]5[/size][/font][font=宋体][size=10pt]－[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]10min[/size][/font][font=宋体][size=10pt]，弃上清液，倒扣于干净的吸水纸上吸干。[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]7K2w%m%?7|7K*a[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
2[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]将菌体沉淀悬浮于[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]350μl STET[/size][/font][font=宋体][size=10pt]缓冲溶液中[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt], [/size][/font][font=宋体][size=10pt]涡旋使其混匀。[/size][/font]
[font=Tahoma][size=1pt]????[/size][/font][size=1pt]ɺ[/size][font=Tahoma][size=1pt]ί[/size][/font][size=1pt]ȋ[/size][font=Tahoma][size=1pt]?Ľ??[/size][/font][size=1pt]ƽ[/size][font=Tahoma][size=1pt]̨6X2B:d6r!K#V5a B7F!E[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
3[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]加入[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]25μl[/size][/font][font=宋体][size=10pt]新配制的溶菌酶溶液[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt](10mg/ml,[/size][/font][font=宋体][size=10pt]用[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)[/size][/font][font=宋体][size=10pt]配制[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]), [/size][/font][font=宋体][size=10pt]涡旋振荡大概[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]3[/size][/font][font=宋体][size=10pt]秒钟。[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]8s"C4|%E-F:V/t4D&Y#E,j'r;V[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
4[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]将[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]eppendorf[/size][/font][font=宋体][size=10pt]管放入沸水浴中[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt],40[/size][/font][font=宋体][size=10pt]秒后立即取出。[/size][/font]
[font=Tahoma][size=1pt]%]%l)N2c![*R0S2|#J9J[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
5[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]微量离心机上以[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]4[/size][/font][font=宋体][size=10pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=10pt]，[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]12000rmp[/size][/font][font=宋体][size=10pt]离心[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]10min[/size][/font][font=宋体][size=10pt]。[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]????[/size][/font][size=1pt]ɺ[/size][font=Tahoma][size=1pt]ί[/size][/font][size=1pt]ȋ[/size][font=Tahoma][size=1pt]?Ľ??[/size][/font][size=1pt]ƽ[/size][font=Tahoma][size=1pt]̨#x.u'e#g8`8v+@[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
6[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]用无菌牙签从[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]eppendorf[/size][/font][font=宋体][size=10pt]管中挑去细菌碎片。[/size][/font]
[font=Tahoma][size=1pt]www.genecool.com8V8k1I'@;Q4B Y9e!F+A5H[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
7[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]在上清中加入[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]40μl 5mol/L[/size][/font][font=宋体][size=10pt]乙酸钠（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]pH5.2[/size][/font][font=宋体][size=10pt]）和[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]420μl[/size][/font][font=宋体][size=10pt]异丙醇，振荡混匀，于室温放置５[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]min[/size][/font][font=宋体][size=10pt]。[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
Z,W1x!V0w:e7H#W:Wâ?[/size][/font][size=10pt]ѻ[/size][font=Tahoma][size=10pt]?[/size][/font][size=10pt]ϭ[/size][font=Tahoma][size=10pt]www.genecool.com[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]8[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]微量离心机上以[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]4[/size][/font][font=宋体][size=10pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=10pt]，[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]12 000rmp[/size][/font][font=宋体][size=10pt]离心５[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]min[/size][/font][font=宋体][size=10pt]，回收核酸沉淀。小心吸去上清液，将离心管倒置于一张纸巾上，[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]www.genecool.com)T9o'm6Q$}-["e ^,u[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]以使所有液体流出。再将附于管壁的液滴除尽。（可参考裂解法中的做法）。[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
!V"B$z7\ c.~9Y1v5a-|/A4Q8Gâ?[/size][/font][size=10pt]ѻ[/size][font=Tahoma][size=10pt]?[/size][/font][size=10pt]ϭ[/size][font=Tahoma][size=10pt]www.genecool.com[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]9[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]加入[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]1ml[/size][/font][font=宋体][size=10pt]７０％乙醇，以[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]4[/size][/font][font=宋体][size=10pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=10pt]，[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]12 000rmp[/size][/font][font=宋体][size=10pt]离心２[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]min[/size][/font][font=宋体][size=10pt]。轻轻地吸去上清，这一步操作要格外小心，有时沉淀块[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
6^(Z)w9[-A C%?â?[/size][/font][size=10pt]ѻ[/size][font=Tahoma][size=10pt]?[/size][/font][size=10pt]ϭ[/size][font=Tahoma][size=10pt]www.genecool.com[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]贴壁不紧，去除管壁上形成的所有乙醇液滴，室温下放置，直至乙醇挥发完全，管内无可见的液体为止[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
&a8h/J5|4`*l-]$Vâ?[/size][/font][size=10pt]ѻ[/size][font=Tahoma][size=10pt]?[/size][/font][size=10pt]ϭ[/size][font=Tahoma][size=10pt]www.genecool.com[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]（大概需要２－５[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]min[/size][/font][font=宋体][size=10pt]）。[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]????[/size][/font][size=1pt]ɺ[/size][font=Tahoma][size=1pt]ί[/size][/font][size=1pt]ȋ[/size][font=Tahoma][size=1pt]?Ľ??[/size][/font][size=1pt]ƽ[/size][font=Tahoma][size=1pt]̨#F5V"[(O!^*n7n[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
10[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]用[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]50μl[/size][/font][font=宋体][size=10pt]无[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]DNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]酶的胰[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]RNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]酶（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]20μg/ml[/size][/font][font=宋体][size=10pt]）的[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]TE(pH8.0)[/size][/font][font=宋体][size=10pt]溶解核酸，稍加振荡即可，贮存于[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]-20[/size][/font][font=宋体][size=10pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=10pt]。[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]www.genecool.com9t,{.o7s"B8[[/size][/font]
[b][font=宋体][size=10pt]注意事项：[/size][/font][/b][b][font=Tahoma][size=1pt]????[/size][/font][/b][b][size=1pt]ɺ[/size][/b][b][font=Tahoma][size=1pt]ί[/size][/font][/b][b][size=1pt]ȋ[/size][/b][b][font=Tahoma][size=1pt]?Ľ??[/size][/font][/b][b][size=1pt]ƽ[/size][/b][b][font=Tahoma][size=1pt]̨6]9z6^+u$E7[&f[/size][/font][/b][b]
[/b][font=Tahoma][size=10pt]1[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]DNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]。[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]????[/size][/font][size=1pt]ɺ[/size][font=Tahoma][size=1pt]ί[/size][/font][size=1pt]ȋ[/size][font=Tahoma][size=1pt]?Ľ??[/size][/font][size=1pt]ƽ[/size][font=Tahoma][size=1pt]̨0Q$`*B7T%|9t!W8I:z1Z"{[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
2[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]添加溶菌酶一定要有限度[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt],[/size][/font][font=宋体][size=10pt]浓度过高细菌裂解效果反而不好，有时不同溶菌酶也能溶菌。[/size][/font][font=宋体][size=1pt]基因酷[/size][/font]
[font=宋体][size=1pt]基因库[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]www.genecool.com9c7J.U7K+I P.s9U[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
3[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]提取的质粒[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]DNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]中会含有[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]RNA,[/size][/font][font=宋体][size=10pt]但[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]RNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]并不干扰进一步实验[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt],[/size][/font][font=宋体][size=10pt]如限制性内切酶消化[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt],[/size][/font][font=宋体][size=10pt]亚克隆及连接反应等。[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]â?[/size][/font][size=1pt]ѻ[/size][font=Tahoma][size=1pt]?[/size][/font][size=1pt]ϭ[/size][font=Tahoma][size=1pt]www.genecool.com#H$Z,U-C-@!J[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
4[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]试验步骤中的细菌沉淀和核酸沉淀中去除上清液时，一定要除尽。[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
/J6|,A8{/_+a8O5l??[url]www.genecool.com[/url]5[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]用[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt] 70% [/size][/font][font=宋体][size=10pt]的乙醇溶液洗涤核酸沉淀时一定要十分谨慎，防止将核酸同洗液一起倒掉。[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]??[url]www.genecool.com[/url];H"F(W6t+S;B"N2m9m/X9W[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
6[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]实验过程中所用的器皿和吸头都要进行高压灭菌。[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
5K.s(P8Z7r7[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]当从表达内切核酸酶[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]A[/size][/font][font=宋体][size=10pt]的大肠杆菌株（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]endA+[/size][/font][font=宋体][size=10pt]株，如[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]HB101 [/size][/font][font=宋体][size=10pt]）中小量制粒[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]DNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]时，建议不用煮沸法。因为煮[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]??[url]www.genecool.com[/url](}9`*e$x;B6j9S#|[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]沸步骤不能完全灭活内切核酸酶Ａ，在[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]Mg2+[/size][/font][font=宋体][size=10pt]存在下温育（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]V[/size][/font][font=宋体][size=10pt]中用限制酶时）质粒[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]DNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]可被降解。[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]若要避免[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]????[/size][/font][size=1pt]ɺ[/size][font=Tahoma][size=1pt]ί[/size][/font][size=1pt]ȋ[/size][font=Tahoma][size=1pt]?Ľ??[/size][/font][size=1pt]ƽ[/size][font=Tahoma][size=1pt]̨3g"E)N#r9P f[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]这一问题可以在用[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]70[/size][/font][font=宋体][size=10pt]％乙醇洗涤一步前增加一步用酚[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]/[/size][/font][font=宋体][size=10pt]氯仿进行抽提。[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]??[url]www.genecool.com5h6?0H-A/J8u[/url][/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
8[/size][/font][font=宋体][size=10pt]、[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]如果要通过限酶切割反应来分析[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]DNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]，可取１[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]μlDNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]溶液加到另一个含８[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]μl[/size][/font][font=宋体][size=10pt]水的微量离心管内，加１[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]μl 10x[/size][/font][font=宋体][size=10pt]限制[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]????[/size][/font][size=1pt]ɺ[/size][font=Tahoma][size=1pt]ί[/size][/font][size=1pt]ȋ[/size][font=Tahoma][size=1pt]?Ľ??[/size][/font][size=1pt]ƽ[/size][font=Tahoma][size=1pt]̨"F4{#R,t/^"w(\;y6[[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]酶缓冲液和１单位所需限制酶，在适宜温度温育１－２[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]h[/size][/font][font=宋体][size=10pt]。将剩余的[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]DNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]贮存于－[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]20[/size][/font][font=宋体][size=10pt]℃[/size][/font][font=宋体][size=10pt]。通过凝胶电泳分析经[/size][/font][font=宋体][size=1pt]基因酷[/size][/font]
[font=宋体][size=1pt]基因库[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]www.genecool.com.A4Z8L,V3Y(D+T1M/n[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]限制酸消化的[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]DNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]片段。如果小量制备的[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]DNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]不被限制酶切开，很有可能在收获细菌的步骤中未能很好地去除[/size][/font][font=Tahoma][size=1pt]www.genecool.com/z.w-y:Y+r.C0{[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]所有上清液体。这种情况下，可用酚：氯仿抽提[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]DNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]终产物，然后用乙醇重新沉淀[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]DNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]，通常，用[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]5[/size][/font][font=宋体][size=10pt]－[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]10[/size][/font][font=宋体][size=10pt]倍过[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
(i3A-N9f5O2m5X??[url]www.genecool.com[/url]      [/size][/font][font=宋体][size=10pt]量的酶（特别是并不昂贵的酶）在[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]100-200μl [/size][/font][font=宋体][size=10pt]体积中进行消化，可以克服限制酶切割反应遇到切割反应遇到的[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]
&|&]0M'[#d5e4i9Aâ?[/size][/font][size=10pt]ѻ[/size][font=Tahoma][size=10pt]?[/size][/font][size=10pt]ϭ[/size][font=Tahoma][size=10pt]www.genecool.com[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]困难。消化后，[/size][/font]
[font=宋体][size=10pt]加[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]0. 1 [/size][/font][font=宋体][size=10pt]体积[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]3mol/L[/size][/font][font=宋体][size=10pt]乙酸钠（[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]pH5.2)[/size][/font][font=宋体][size=10pt]和２倍体积乙醇沉淀[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt]DNA[/size][/font][font=宋体][size=10pt]。[/size][/font][font=Tahoma][size=10pt][/size][/font][/align][/align][font=Times New Roman][size=3][color=#000000] [/color][/size][/font]

flashhyh 发表于 07-8-13 09:09

图片测试：
[align=center][attach]1890[/attach][/align]

flashhyh 发表于 07-8-13 09:30

小图片测试

flashhyh 发表于 07-8-13 09:37

小于400×400的测试

flashhyh 发表于 07-8-13 09:40

小于400×400的测试：
[attach]1898[/attach]

flashhyh 发表于 07-8-13 09:41

小于400×400的测试：



[attach]1899[/attach]

土拨鼠 发表于 07-8-13 11:03

试试

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