【分享】PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表(页 1) - PCR技术讨论 - 基因酷基因库 Genecool 生物资源共享|生物实验技术|生物产业技术|生物资源互换|质粒互换|基因互换|菌株互换|生物论坛

angelblue9 发表于 07-7-15 20:01

【分享】PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表

我遇到这方面的麻烦了，希望这对酷友有帮助！

angelblue9 发表于 07-7-15 20:10

Re: 【分享】PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表

Hind III                       C AAGCTT G  CC AAGCTT GG  CCC AAGCTT GGG 加两个保护碱基20h酶切，切割率居然为0~~~~~~~ 完蛋了，我的上游引物HindIII酶切位点上游只加了两个保护碱基，有救吗？？？？？ 用TAQ酶的扩增会在3’端加A，这样能不能提高后续的酶切？？？不知道多了个A的黏末端有没有效！

fgm 发表于 07-7-16 11:35

Re: 【分享】PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表

保护碱基的确很有讲究，有的时候不对，怎么切都切不动，谢谢angelblue9 分享。

angelblue9 发表于 07-7-16 13:20

Re: 【分享】PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表

是不是保护碱基数够了就行？至于加什么样的碱基应该没事吧！发觉越来越敏感了！

binbintt 发表于 07-7-18 11:04

Re: 【分享】PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表

是不是哦，我以前感觉如同楼上的所言，但是最近有个产物老是切不下来，让我郁闷的很

angelblue9 发表于 07-7-18 12:06

Re: 【分享】PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表

这是我帮别人做的，引物设计好了。
他以前做的步骤是，将目的基因连接到T载体上，在T载体上切割，然后才连到另一个表达载体上。

而我想省了T载体这一步，想一步到位，结果小问题给忽视了！

cuilinzhiniao 发表于 07-7-19 18:15

Re: 【分享】PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表

To:angelblue9
上游引物HindIII酶切位点上游只加了两个保护碱基，有救吗？
回答：有救，不过你只能先连接到T载体上，测序后，再从T载体上切就可以了。
用TAQ酶的扩增会在3’端加A，这样能不能提高后续的酶切？？？不知道多了个A的黏末端有没有效！
回答：对提高酶切效果不是很大。

angelblue9 发表于 07-7-19 22:34

Re: 【分享】PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表

谢谢您了！我的引物是别人帮忙合成的，他的流程是把它连接到T载体，而我不做这一步，因为我们实验没有T载体，呵呵，最主要比较麻烦，想一步到部。可是引物问题给忽视了，因为刚入行，有很多细节压根不知道，总是为之付出代价后才惊醒！

ghjkl159357 发表于 07-12-12 15:48

怎么Sal I 加保护碱基后，酶切效率还那么低，不是可以不加保护碱基吗？[url]http://www.zsr.cc/ExpertHome/StudyDatum/200701/75876.html[/url]

hiablen 发表于 07-12-18 22:23

谢谢您的分享！这对分子生物学方面真是太有用了！

ziwen120717 发表于 08-3-28 21:15

保护碱基的问题是具体分析的。我有时候用一个保护碱基也是可以酶切的。效率还可以。具体情况还需要摸索。

liuminggy 发表于 08-4-15 20:09

谢谢您的分享！这对分子生物学方面真是太有用了！

asdwind 发表于 08-4-24 17:49

:lol
谢谢分享我正需要现在正在作这个

W_shaonong 发表于 08-5-21 21:22

Many thanks

夏日微风 发表于 08-8-18 01:38

多谢分享！

yanfan5543 发表于 08-8-27 14:59

gsdaaaaaaaaaaaaaaaaaa

glilyq 发表于 08-9-2 10:15

看一看啊！谢谢分享！

glilyq 发表于 08-9-2 10:16

谢谢分享！看一下

xuhuaiqian 发表于 08-9-5 09:17

:qq68: 非常感谢

想飞的鱼 发表于 08-9-21 11:09

为什么我不可以下载附件:quest: :quest:

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