【求助】蛋白融合表达和共表达的不同？
<p>想请教一下,融合蛋白和两个蛋白共表达,在最后表达出的蛋白质用途上有什么区别?谢谢!</p>Re: 【求助】融合蛋白
这个主要还是和你的试验设计有关系。<br /> 在原核细胞中表达外源基因时，由于实验设计的不同，总的来说可产生融合型和非融合型表达蛋白。不与细菌的任何蛋白或多肽融合在一起的表达蛋白称为非融合蛋白。非融合蛋白的优点在于它具有非常接近于真核细胞体内蛋白质的结构，因此表达产物的生物学功能也就更接近于生物体内天然蛋白质。非融合蛋白的最大缺点是容易被细菌蛋白酶所破坏。为了在原核生物细胞中表达出非融合蛋白，可将带有起始密码ATG的真核基因插人到原核启动子和S-D序列的下游，组成一个杂合的核糖体结合区，经转录翻译，得到非融合蛋白。<br /><br /> 融合蛋白是指蛋白质的N末端由原核DNA序列或其他DNA序列编码，C端由真核DNA的完整序列编码。这样的蛋白质由一条短的原核多肽或具有其他功能的多肽和真核蛋白质结合在一起，故称为融合蛋白。含原核细胞多肽的融合蛋白是避免细菌蛋白酶破坏的最好措施。而含另外一些多肽的融合蛋白则为表达产物的分离纯化等提供了极大的方便。表达融和型蛋白应非常注意其阅读框架，其阅读框架应与融和的DNA片段的阅读框架一致，翻译时才不至于产生移码突变。 <br /> 其实说白了<span class="javascript" id="text553585"><font class="topic">融合蛋白</font></span>就是<span class="javascript" id="text553585"><font class="topic">是指两个不同的基因或基因片段连接在一起，使用同一个启动子进行翻译，而且二者直接没有终止子，结果翻译后，两个不同的蛋白就连在一起，形成融合蛋白。<br /> 此外在一个载体上共表达两个蛋白现在常用的有两类载体,一类是IRES（即核糖体载入序列）,还有一类是双启动子表达,这两类都有商品化的载体可以买到。<br /></font></span> <br /><br />Re: 【求助】蛋白融合表达和共表达的不同？
融合表达：fusion expression，共表达：co-expression 两个是不相关的概念。<br /><br />从字面意思来看，融合表达就是融合其他多肽或蛋白和自己的蛋白一起表达出来，其中的意思，楼上的老兄解释了比较清楚了。但是我们要获得我们原始大小的蛋白，并非一定需要非融合型来表达，我们可以融合一些多肽利于我们下游的纯化，而在多肽和目标蛋白之间加上蛋白酶切位点，最后我们可以用蛋白酶切掉，就获得我们要的目标蛋白<br /><br />共表达：可以使多质粒转到一个细胞里面，分别同时表达。也可以利用共表达载体，其含有两个独立的启动子，rbs，MCS等等（如novagen的pETDuet-1），由一个载体分别表达2个蛋白或亚基！共表达在蛋白里有两个或两个以上不同亚基时，我们会用得到。如限制性内切酶，有Res酶和Mod酶。<br /><br />Re: 【求助】蛋白融合表达和共表达的不同？
楼主欲尝试的就是一个蛋白的两个亚基的共表达吧。如果是这种情况，融合表达可能效果更好。而共表达则可能会存在效率较低的问题。但共表达不会出现两个亚基形成活性蛋白时空间产生阻遏的情况。Re: 【求助】蛋白融合表达和共表达的不同？
谁介绍个带IRES序列的载体说明我学习下？呵呵Re: 【求助】蛋白融合表达和共表达的不同？
[quote user="nano"]谁介绍个带IRES序列的载体说明我学习下？呵呵[/quote]目前最为常见的是clonetech公司（现在被Takara收购）的IRES载体系列。
这是IRES载体list，咱们质粒库里有这个。
http://www.clontech.com/support/vectors.asp?cat_id=&q=pIRES&image.x=42&image.y=11
附件是IRES，最简单的IRES载体简要说明。 :lol :excellent:
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