荧光定量PCR问题
在实验过程中遇到了以下问题,在荧光定量PCR试验中存在绝对定量和相对定量,一般来说比较基因表达差异时用相对定量,那么下面情况该如何选择,希望能帮忙指点:1.在我不知道我的样品的内参基因的情况下,我如果想比较我的样品在不同生长时期或不同组织中某个基因表达量变化情况,是否可以用绝对定量来做,就是先绝对定量各个时期样品中该基因的拷贝数,然后再对这些数据进行比较,从而分析其表达变化情况?不知这个思路是否可行?
2.另外,我们常说的actin等内参基因,是指在生物体不同发育阶段、不同组织器官中其表达量都是恒定的吗?都可以以此为内参,通过相对定量来分析不同发育阶段不同组织中某基因的表达差异情况吗?如果内参这这种情况下表达不恒定,即在无内参基因可选择的情况下,是不是就用绝对定量来分析不同发育阶段基因表达量的差异?
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