基因酷 基因库 Genecool » 基因技术讨论 » 请问：为什么质粒用脂质体转染细胞，转染不进去？？

skmaple 发表于 08-9-5 20:36

请问：为什么质粒用脂质体转染细胞，转染不进去？？

请问：为什么质粒用脂质体转染细胞，转染不进去？？                                                                                                                                                                                                                                                                                                                        我用的质粒是8000bp的质粒，是PCDNA3.1 不知道带不带荧光，接的目的片段是TRPM8基因 ，用脂质体转染，脂质体是invitrogen的脂质体2000.转染时两者比例是质粒：脂质体=4ug：10ul。但是转进去6h后换液，然后每隔6h拍照，看不见任何荧光。不知道为什么？？我做了一个已知有荧光的质粒做对照的，这个质粒以前转染，转染的进去，也可以看到荧光。但是这一次，这个已知有荧光的质粒也什么都看不到。不知道是不是没有转进去。也不知道为什么没有转染进去？？请高手分析原因。谢谢！

纤夫 发表于 08-9-6 12:42

PCDNA3.1载体没有荧光标签的，除非你用的载体是人为加入了荧光标签。你先看看是不是这个载体的问题。

skmaple 发表于 08-9-6 14:25

我也不知道有没有荧光。这里有图谱，请帮忙看下

这是质粒信息的图谱，是invitrogen的PCDNA3.1
我不认识上面接没有接荧光。请帮忙看一下

纤夫 发表于 08-9-6 17:17

这个不是PCDNA3.1，而是PCDNA3，有区别哦，呵呵。
不过不管是哪个，都没有荧光标签的，我们实验室用过的。就象我上面说的，除非对质粒进行过改造，否则是肯定没有荧光标签的。

nano 发表于 08-9-6 20:11

是否成功转染用RT-PCR和WB鉴定

vivin 发表于 08-10-7 20:19

一步步排除，看看是转染的哪一步出了错，没道理转染不进去，转染以后培养细胞，然后荧光显微镜下或pcr进行验证即可、

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