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ljdsc06 发表于 08-8-15 20:55

求助:离子交换层析洗脱相中的表面活性剂问题

如题,蛋白离子交换层析中,只洗出了两个杂蛋白峰,其余的在柱子上方洗不下来,即使是离子强度达到1M。调节pH也没有改变。觉得可能是沉淀在上部了,查文献说可以在洗脱相中加表面活性剂或乙二醇改善,可是不知道应如何设置浓度选择表活种类。麻烦各位大侠多多指教,:qq68: 先谢谢啦!

hamye 发表于 08-8-15 21:38

要清洗填料,请首先参考说明书上的填料再生和在位清洗方法,一般都可以达到目的。
如果不行,或你想尝试其他方法,填料说明书上应该都有一些填料耐受的参数说明。
离子交换填料的清洗,用乙醇、异丙醇、NaOH、表活,都是可以的,其中的有些不常用,表面活性剂,如tween、triton等,浓度一般控制在1%以下。

ljdsc06 发表于 08-8-15 22:02

谢谢hamye   :) !
我的填料再出现这种情况后,按一般的方式能够完成清洗再生。但含有目的蛋白的部分洗不下来,我在调pH效果不好的情况下,想参考文献方法在洗脱相中加表活或乙二醇,我的填料是DEAE琼脂糖,该怎么选表活,怎么定浓度呢?再就是,当加入有机相的表活后,构成离子强度的盐会不会析出来呢?查文献没见到相关报道与讨论,谢谢!

ljdsc06 发表于 08-8-18 08:52

各位大侠多多指导啊!
如果不采取加表活或乙二醇的话,还有没有其他好方法呢?

hamye 发表于 08-8-18 14:33

你查了文献的话,就照着多试试吧。填料也没那么脆弱的。怎么处理也没一定的程序,可能每个人的处理方法都会有区别,但基本的也就那些,说明书应该都写着呢。

另外,你说可能是沉淀了,那么用变性剂试试吧,把沉淀的东西溶解了再说。如果是沉淀的话,堵在上部用什么都洗不下来啊。柱上部污染了,洗的时候方向洗。

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