基因酷 基因库 Genecool » 基因技术讨论 » 如何消除电泳时出现的引物二聚体条带？

mesearl 发表于 08-8-6 14:08

如何消除电泳时出现的引物二聚体条带？

如何消除电泳时出现的引物二聚体条带？

kay0205 发表于 08-8-6 14:41

从没想过这个问题，关注中

shuanhu2007 发表于 08-8-6 15:12

pcr后将产物在65度水浴中加热5-10分钟，可以减少二聚体的亮度。试试看

nano 发表于 08-8-6 20:45

最好还是从头做起，引物设计得好是最重要的
楼上这个方法能适用于所有的体系吗？什么道理，想不明白

kay0205 发表于 08-8-6 22:25

是不是较短链的引物二聚体在中温下容易解链，导致EB插入双螺旋的数明显减少/从而使亮度大为减弱？

lichuan04 发表于 08-8-7 09:58

如果只是为了拍照漂亮的话没必要这么复杂了，直接PS就OK了，我觉得楼主的意思可能还是减少PCR产物中的二聚体，目前有一些PCR产物回收试剂盒，对二聚体的去除比较有效，另外如nano所言，设计好的PCR引物是解决问题的关键。

nano 发表于 08-8-7 20:33

二聚体解链，冷却下来不还是双链吗？呵呵，我是这么理解哈
PS的话不适用分子量小的带，前一阵为了一个双酶切图搞了几天，RNA消化不彻底，干扰只有100BP的双酶切产物带型，得到一张满意的图有时候还是蛮费心的，不过可能也是完美主义的祸，有时候老外文章上的图也蛮丑的

vivin 发表于 08-10-7 20:48

引物设计也许有问题，引物存在互补碱基，易于二聚。并不一定要事事追求完美，有时候过于追求完美就是浪费时间。结果阳性就行。

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